PBMC后流式CD3-FITC、CD25-FE、CD4-APC等，求教问题！

gxdxhot

先说说自己的实验：血液PBMC分离后，PBS洗两次加抗体CD3-CD25-CD4，孵育30min. 然后加单独抗体做补偿对照。空白管来射门。

现在觉得图片问题好多， 跑了很多次也调不好，求大神老师帮忙分析下。

实验结果：
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODEyMnw5ZjkxZTIxZXwxNzMzMjUzNDg3fDB8

niwanmao

不知道你要测具体什么指标？也就是实验目的是什么。

但你这里后面几个实验管的细胞贴轴现象太明显了，电压和补偿都没变过吗？

gxdxhot

niwanmao 发表于 2015-6-1 09:06
不知道你要测具体什么指标？也就是实验目的是什么。

但你这里后面几个实验管的细胞贴轴现象太明显了，电压 ...

老师你好，我的实验是想检测CD3/CD56双阳性，CD4/CD25双阳性，CD4/CD8双阳性的细胞比例。阴性细胞射门时候所有细胞没有贴轴现象，后面单阳管跑出来就贴轴，自己也调不过来。导致后面的实验都是这样的了
老师帮忙分析下，我该调哪些内容？谢谢！！我用的是Beckman 3激光9色流式

niwanmao

gxdxhot 发表于 2015-6-1 20:38
老师你好，我的实验是想检测CD3/CD56双阳性，CD4/CD25双阳性，CD4/CD8双阳性的细胞比例。阴性细胞射门时 ...

你应该是用gallios吧？可以用配置中的baseline勾上把这些信号显示出来。

如果你要分析CD3/CD56双阳性，CD4/CD25双阳性，CD4/CD8双阳性，为什么不画这些散点图，我只看到CD4/CD25散点图。此外，你其它抗体有没有加？

gxdxhot

niwanmao 发表于 2015-6-1 21:41
你应该是用gallios吧？可以用配置中的baseline勾上把这些信号显示出来。

如果你要分析CD3/CD56双阳性，C ...

我用的是贝克曼 CytoFLEX。CD3/CD56双阳性，CD4/CD8双阳性，的散点图我没有贴上去。结果都是差不多，都是贴坐标轴很明显。不知道怎么回事？
老师再问下，射门之后电压就不能动了吗？

niwanmao

gxdxhot 发表于 2015-6-2 22:56
我用的是贝克曼 CytoFLEX。CD3/CD56双阳性，CD4/CD8双阳性，的散点图我没有贴上去。结果都是差不多，都是 ...

只要在获取，就可以动啊，获取完了当然不能动。
设门和电压动不动没有关系。

cytoFLEX不是免调电压吗？

家的感觉

一般为什么会出现贴轴的现象呢？偶尔也遇到过，而且贴的很厉害

niwanmao

家的感觉 发表于 2015-6-3 09:55
一般为什么会出现贴轴的现象呢？偶尔也遇到过，而且贴的很厉害

信号压轴与补偿、电压均有关系，少量压轴可以，但如果大量细胞都是压轴的，就需要回顾一下电压和补偿了，可能电压或者补偿没有调对。

家的感觉

niwanmao 发表于 2015-6-3 17:47
信号压轴与补偿、电压均有关系，少量压轴可以，但如果大量细胞都是压轴的，就需要回顾一下电压和补偿了， ...

好的，以后我们留意一下