人外周血测Treg，破膜后T细胞比例下降？

ddn111

背景：检测人外周血Treg，标记CD3、CD4、CD25、FOXP3，常规方法，固定破膜检测！今天实验，同一标本，留了个未固定破膜组作对照，发现破膜前后CD3+淋巴细胞比例差异明显，且固定破膜后FMO和实验组之间也有差别，以前还真没有注意差异这么大，原因何在？
1、固定破膜后碎片增多，导致CD3+比例降低，还有其它原因吗？
2、这种差异，特别是FMO和实验组的差异对结果分析有无影响？我的理解是引入死活细胞鉴定染料能最大限度减少影响！
图示说明：SSC分别取了LIN和LOG比较！

niwanmao

你是否可以将碎片排除掉看看比例？

zhang4083

我的观点。
固定破膜后，细胞碎片增加。

再收集的过程中，取相同细胞数目时候,, 由于流式把碎片当成细胞来看。
收集时间及收集数目相同时，收集的碎片比例增加，相应的细胞数目比例自然降低。

做白血病免疫分型时，MPO等结果也是一个道理。