请教流式灵敏度验证MESF值的问题

陌上桑

倪老师，你好
我们打算做一次流式仪灵敏度验证，用的是Rainbow Calibration Particles (6 peaks)试剂，然后找贝克曼要了一份PQ验证的报告过来，但是却不知道MESF值怎么得到的，问试剂供应商的技术员也回答不上，特地来请教您。如果有其他朋友也做过类似的验证，请教一下你们MESF值是怎么算出来的。下面我把贝克曼的方案贴出来，请大家指教

方法：在装有1ml鞘液的试管中加入适量的标准微球，充分混匀后上机检测，可对电压设置值进行调节，确保所有的峰值都可以在直方图上识别和分布。对试验结果进行直方图分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量可溶性荧光分子（MESF）数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，按照随试剂附带的标准软件进行统计计算。（我特地问了卖试剂那边的技术员，他说试剂没有附带什么软件）

判定标准：FITC<200 MESF

niwanmao

我还真没测过仪器灵敏度，因为我们也不是做仪器的，只要平时的质控微球能够通过、标本中正常细胞群的分布没有问题，基本上就能满足临床需求了。

MESF就是Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome，Quantum公司的微球有一个quickCal软件，但是spherotech的似乎没看到，说明书里面也没讲具体什么软件吗？我看他们说明书应该就是进行直线回归定出灵敏度的，你可以试着进行平均荧光强度直线回归看看。

陌上桑

niwanmao 发表于 2015-6-8 16:53
我还真没测过仪器灵敏度，因为我们也不是做仪器的，只要平时的质控微球能够通过、标本中正常细胞群的分布没 ...

谢谢倪老师的解答，我从试剂说明书里面没看到MESF的介绍，我再问问仪器厂家那边吧，问到之后再回复这边

陌上桑

niwanmao 发表于 2015-6-8 16:53
我还真没测过仪器灵敏度，因为我们也不是做仪器的，只要平时的质控微球能够通过、标本中正常细胞群的分布没 ...

倪老师，你好。我从网上找到关于MESF计算的方法了。
1.   使用多峰微球（Rainbow Calibration Particles，8-peaks）在流式细胞仪上检测，得到空白微球（P0）和7个荧光微球峰（P1-P7）的平均荧光强度（对数）；

    2.   按下面公式，将P0-P7的荧光强度（对数）转换成荧光道数（线性256）；

    3.   以P1-P7的荧光道数为x轴、以说明书中提供的相应荧光微球的MESF（对数）为y轴作图，并求出线性回归方程；

    4.   将空白微球（P0）的荧光道数带入线性回归方程，即可获得以MESF表示的荧光灵敏度。如图所示，迈瑞BriCyte E6流式细胞仪实测的FITC和PE通道的荧光灵敏度分别为87和43 MESF，远低于国家标准《YY/T 0588-2005 流式细胞仪》中FITC≤200 MESF，PE≤100 MESF的技术要求。
参考链接：http://blog.sina.com.cn/s/blog_b1385cdd0102vkkq.html

chymanhz

在装有1mL鞘液的试管中加入适量标准微球，充分混匀后上机进行试验，可对电压设置值进行调节，确保所有的峰值都可以在直方图上识别和分布。对试验结果进行直方图分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量可溶性荧光分子（MESF）数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，取常用对数（Lg值）做线性回归，空白微球处的平均荧光强度值对应的MESF数的反对数即为荧光灵敏度。ACEA的NovoCyte灵敏度大概在10以下。不知道你们测灵敏度的目的？实际上几百的MESF的灵敏度已经够用了。再低也就是宣传噱头了。

niwanmao

hannotech

QuickCal® 分析模板可以免费下载，如果有购买了MESF kit，里面有个批号，输入就能用了。每一个批号的产品预设的参数都不一样

草履虫小小

如果你用的是Spherotech的6峰球，直接滴两滴加1MLPBS稀释上样，调整电压使各个通道的六个封明显的区分开。并对每个峰进行范围门圈门。Spherotech的供应商会提供一个专用的计算模板给你，你把圈门得到的mean值带入模板计算就可以了。

@Crystal

niwanmao 发表于 2015-6-16 21:41

请问倪老师，relative channel number的计算公式怎么来的

niwanmao

@Crystal 发表于 2020-7-16 14:46
请问倪老师，relative channel number的计算公式怎么来的

Relative channel#=R*Log10（mean channel#）/log(Dynamic range)，R=256