流式也能诊断结核

niwanmao

结核杆菌（TB）感染的发病率仍然不低，在韩国2008年的发病率大约是10万分之70。结核杆菌的感染诊断手段国内尽管已经从结核菌皮试和TB抗体检测发展到IGRA检测（干扰素γ释放试验），IGRA检测包括TB-SPOT和QuantiFERON-TB Gold，后者特异性和敏感性更强。然而IGRA检测还是基于酶联免疫吸附法（ELISA），还是存在一定的敏感性限制。为此，Won等人在2010年在Cytometry杂志上发表了一篇文章，利用MTB衍生抗原（ESAT-6和CFP-10）刺激T细胞，然后用胞内因子流式细胞术（ICCFC）检测T细胞内的IFN-γ和TNF-α，将该方法与QuantiFERON-TB Gold进行了对比。

标本：
外周血，以空白对照、MTB抗原、PHA分别在37℃下刺激16小时。
（1）做QuantiFERON-TB Gold检测的标本，每孔取 200μL血浆以QuantiFERON-TB Gold检测，以>0.35IU/ml为阳性标准。
（2）做ICCFC的，加入细胞因子分泌抑制剂，孵育2小时，然后取 0.5ml全血转移到15ml塑料管中，加入BFA（终浓度10μg/ml），再经14小时孵育后，加入5ml含固定成分的裂解液，裂解红细胞并且固定细胞，此时可以保存在-80℃下。收集到一批标本时，可以一起在37℃温水中复苏，以7ml PBS洗涤一次，加入2ml PBS在37℃下孵育10分钟，再次洗涤，接着加入90μL破膜剂，作用10分钟，最后加入IFN-γ、TNF-α、CD4、CD3抗体孵育。最后上机检测。

分析流程如下图：



下表显示的是各类细胞亚群的阈值及其敏感性：

最后，22例QuantiFERON-TB Gold阳性的病例，ICCFC也全部阳性，而14例QuantiFERON-TB Gold阴性的病例中，64％ICCFC可以检测出阳性（9/14），提示ICCFC的敏感性远高于QuantiFERON-TB Gold。
至于15例非TB患者的假阳性率，ICCFC只有1例假阳性，并且只是在ESAT-6刺激的标本中（表达率13.3％，阈值12.6％）。

不过在第90届日本结核病学年会针对QuantiFERON-TB Gold和TB-SPOT的对比研究中，QuantiFERON-TB Gold却表现出色，流式中文网认为可能跟选择的病例有关。相信流式的敏感性应该是更强。

在线阅读（免费，与PDF一致，并支持划词翻译）：
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODI5NnxmZTUzMDg3OXwxNzQwMzM5MzU0fDB8


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2015-6-18 21:50 上传

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