流式设门问题

lypzy1221

倪老师，您好！
我这边遇到一个问题：在流式检测过程中，我们一般会做ISO，根据ISO来进行设门，这样的话会出现设的门刚好在一个峰的中间（如下图），我不知道这是不是正确的，所以想请倪老师指导~

ISO TYPE

CD8 是按ISO设门（红）还是按经验设门（绿）

niwanmao

家的感觉 发表于 2015-7-13 16:36
为什么不以红的线为阴阳分解？对照不是以红色的线划的分解吗？用绿色的线和空白管的不一致了啊 ...

前几天讲过这个设门问题：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4533-1-1.html

niwanmao

对的。这说明你要检测的抗原刚好呈双峰分布，阳性群和阴性群分得很好。

家的感觉

niwanmao 发表于 2015-7-12 19:26
对的。这说明你要检测的抗原刚好呈双峰分布，阳性群和阴性群分得很好。

图片上红色的门是阴阳分界门，第二个图中红色的线不是绿色的线啊，红色的线在第一个峰的中间，这样阴阳是以绿色的线为界线，还是以红色的为界线？

小憨

家的感觉 发表于 2015-7-13 08:38
图片上红色的门是阴阳分界门，第二个图中红色的线不是绿色的线啊，红色的线在第一个峰的中间，这样阴阳是 ...

绿的就行

家的感觉

小憨 发表于 2015-7-13 15:42
绿的就行

为什么不以红的线为阴阳分解？对照不是以红色的线划的分解吗？用绿色的线和空白管的不一致了啊

家的感觉

niwanmao 发表于 2015-7-13 20:15
前几天讲过这个设门问题：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4533-1-1.html

恩，我也看了，就想着阴性门设定好应该就以这个门为分界线吧，对“小憨”所说的“绿的就行”有些迷惑了

lypzy1221

现在我遇到的问题主要是这样的，使用ISO设定阴性门后，加入标记的抗体发现阴性的那群细胞整体往右移了，这就导致我设门的时候不知道是按ISO的设门（上图红色）还是按照双峰之间经验设门（上图绿色）。我看了倪老师的帖子，上面没有说阴性细胞部分右移的情况啊

小憨

家的感觉 发表于 2015-7-14 08:16
恩，我也看了，就想着阴性门设定好应该就以这个门为分界线吧，对“小憨”所说的“绿的就行”有些迷惑了 ...

有些时候细胞分群不是说“绝对的不表达”和“完全高表达”，而是相对的“高表达”和“低表达”，所以说有些“CDXXX分子阴性（阳性）细胞群”是指第二种情况；有的时候细胞非特异染色情况比较高的时候也容易出现你这种“阴性群不太阴”的情况，画门的时候要注意只要能把两群分开即可。
其实你仔细观察，同样的细胞和指标，每次检测时阴性峰的位置都会稍稍不一样，所以我们老师要求我们每次实验组和对照组要一起操作，不能先把实验组做完了再做对照组。

niwanmao

lypzy1221 发表于 2015-7-15 15:20
现在我遇到的问题主要是这样的，使用ISO设定阴性门后，加入标记的抗体发现阴性的那群细胞整体往右移了，这 ...

这种情况一般都是由于阴性对照选择不正确，或者阳性细胞的非特异性（背景）荧光太强的缘故，此时允许按照分界位置右移。