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[其它] 流式设门问题

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发表于 2015-7-11 09:02:17 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星已解决
倪老师,您好!
我这边遇到一个问题:在流式检测过程中,我们一般会做ISO,根据ISO来进行设门,这样的话会出现设的门刚好在一个峰的中间(如下图),我不知道这是不是正确的,所以想请倪老师指导~

ISO TYPE

ISO TYPE

CD8 是按ISO设门(红)还是按经验设门(绿)

CD8 是按ISO设门(红)还是按经验设门(绿)

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前几天讲过这个设门问题:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4533-1-1.html
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发表于 2015-7-11 09:02:18 | 显示全部楼层
家的感觉 发表于 2015-7-13 16:36
为什么不以红的线为阴阳分解?对照不是以红色的线划的分解吗?用绿色的线和空白管的不一致了啊 ...

前几天讲过这个设门问题:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4533-1-1.html
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发表于 2015-7-12 19:26:55 | 显示全部楼层
对的。这说明你要检测的抗原刚好呈双峰分布,阳性群和阴性群分得很好。
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发表于 2015-7-13 08:38:08 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-7-12 19:26
对的。这说明你要检测的抗原刚好呈双峰分布,阳性群和阴性群分得很好。

图片上红色的门是阴阳分界门,第二个图中红色的线不是绿色的线啊,红色的线在第一个峰的中间,这样阴阳是以绿色的线为界线,还是以红色的为界线?
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发表于 2015-7-13 15:42:57 | 显示全部楼层
家的感觉 发表于 2015-7-13 08:38
图片上红色的门是阴阳分界门,第二个图中红色的线不是绿色的线啊,红色的线在第一个峰的中间,这样阴阳是 ...

绿的就行
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发表于 2015-7-13 16:36:56 | 显示全部楼层

为什么不以红的线为阴阳分解?对照不是以红色的线划的分解吗?用绿色的线和空白管的不一致了啊
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发表于 2015-7-14 08:16:29 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-7-13 20:15
前几天讲过这个设门问题:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4533-1-1.html

恩,我也看了,就想着阴性门设定好应该就以这个门为分界线吧,对“小憨”所说的“绿的就行”有些迷惑了
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 楼主| 发表于 2015-7-15 15:20:38 | 显示全部楼层
现在我遇到的问题主要是这样的,使用ISO设定阴性门后,加入标记的抗体发现阴性的那群细胞整体往右移了,这就导致我设门的时候不知道是按ISO的设门(上图红色)还是按照双峰之间经验设门(上图绿色)。我看了倪老师的帖子,上面没有说阴性细胞部分右移的情况啊
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发表于 2015-7-15 16:13:03 | 显示全部楼层
家的感觉 发表于 2015-7-14 08:16
恩,我也看了,就想着阴性门设定好应该就以这个门为分界线吧,对“小憨”所说的“绿的就行”有些迷惑了 ...

有些时候细胞分群不是说“绝对的不表达”和“完全高表达”,而是相对的“高表达”和“低表达”,所以说有些“CDXXX分子阴性(阳性)细胞群”是指第二种情况;有的时候细胞非特异染色情况比较高的时候也容易出现你这种“阴性群不太阴”的情况,画门的时候要注意只要能把两群分开即可。
其实你仔细观察,同样的细胞和指标,每次检测时阴性峰的位置都会稍稍不一样,所以我们老师要求我们每次实验组和对照组要一起操作,不能先把实验组做完了再做对照组。
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发表于 2015-7-15 16:46:02 | 显示全部楼层
lypzy1221 发表于 2015-7-15 15:20
现在我遇到的问题主要是这样的,使用ISO设定阴性门后,加入标记的抗体发现阴性的那群细胞整体往右移了,这 ...

这种情况一般都是由于阴性对照选择不正确,或者阳性细胞的非特异性(背景)荧光太强的缘故,此时允许按照分界位置右移。
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