PI的通道问题

十二郎

各位好，请教一个问题，ECD通道发射光为610/20，PE通道为585/42，PC5.5通道为690/50，PI发射光为617。因PI的发射光谱过宽，当用PE和PC5.5双色标记某一细胞群时，是不是就不能用ECD通道检测PI 呢？？？请各位指教，谢谢{:soso__3409329614010722382_4:}

Arcrain

如果要用PI测细胞周期，再加另外两个荧光，我的看法是：
488nm激发的PI和FITC可以区分开，我原来在FACSCalibur上就碰到过（PI+GFP，PI+BrdU，乙醇固定），注意调节一下补偿，可以得到良好的结果。再加其它荧光的话，638nm激发的APC和APC-Cy7可以用，488nm激发的PE-Cy7也可以用，这样，FITC，PE-Cy7，APC，APC-Cy7都可以同时用了，当然要看仪器配置。
用乙醇固定细胞标记PI，乙醇固定可能会破坏某些抗原表位，影响染色。一般认为甲醛固定不会破坏抗原，可以用去垢剂透膜穿孔的办法来让细胞标记上PI。

Arcrain

PI，PE，PE-Cy5.5，这三个染料中PI对其它两个的发射光谱重叠太大！都可以用488nm和561nm激光激发。建议不要加上PI。
d:\1.bmp


区分死活可以用405nm激发的DAPI（死细胞高亮）、sytoxblue等染料来进行，不影响其它通道。

十二郎

Arcrain 发表于 2015-7-14 16:49
PI，PE，PE-Cy5.5，这三个染料中PI对其它两个的发射光谱重叠太大！都可以用488nm和561nm激光激发。建议不要 ...

  没有405的激光   sytoxblue和DAPI都是405激发。区分死活细胞的话eb公司也有一种染料，可以用APC通道。我是想只有488和638的时候，做多色或者说双色标记细胞的细胞周期就不能用PI了，那应该怎么办呢？？

niwanmao

十二郎 发表于 2015-7-15 09:04
没有405的激光   sytoxblue和DAPI都是405激发。区分死活细胞的话eb公司也有一种染料，可以用APC通 ...

Life的live/dead kit有FL1通道的。

十二郎

Arcrain 发表于 2015-7-15 10:08
如果要用PI测细胞周期，再加另外两个荧光，我的看法是：
488nm激发的PI和FITC可以区分开，我原来在FACSCali ...

解答太赞了，必须5分好评。另外问一下做细胞周期的话，除了用PI还有其他染料吗？你说的固定用的甲醛是指1%的多聚甲醛吗？？

Arcrain

活细胞周期检测有Hoechst33342，需要355nm激光器，而且想要得到较好的周期峰，可能需要摸索一下实验条件，小心操作。
DAPI可染死活细胞，测量周期时是染死细胞。

到Life网站上看看，收购Invitrogen-Molecule Probe后他们推出了一系列检测死、活细胞的DNA含量的试剂盒，有不同颜色。

用4%中性甲醛（PBS中，PH7.2-7.4）固定细胞，可以很好的保持组织细胞的抗原活性。4%多聚甲醛主要用于培养细胞的固定。