新手做的Treg流式，请教如何分群

366722485 · 发表于 2015-7-29 17:53:33

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最近做的小鼠脾脏的Treg的流式，取脾脏后加5u每ML CONA ,体外培养72H，收细胞之前6h加BD的pma、lonomycin、Golgiplug混合试剂，染色，请各位老师同学帮忙看下，分群不清怎么办，尤其是FOXP3应该如何圈？

Desktop.rar (3.8 MB, 下载次数: 38)

niwanmao · 发表于 2015-7-29 19:58:37

你的foxP3通道电压是不是太高了？导致细胞全部上去了，阳性细胞跑到外面去了：

从贴轴信号看，似乎应该是R3这里，如下图。

366722485 · 发表于 2015-7-29 20:06:47

其中foxp3这个图，方框内只占不到30%，是什么原因，这一群是阴性还是阳性？

366722485 · 发表于 2015-7-29 22:17:56

niwanmao 发表于 2015-7-29 19:58
你的foxP3通道电压是不是太高了？导致细胞全部上去了，阳性细胞跑到外面去了：

谢倪老师的指点，如果是R3这一群的话，是不是有点太低了？还有就是我楼上贴的这幅图，单纯看foxp3是不是电压太低导致左边铁轴了。

niwanmao · 发表于 2015-7-30 10:26:47

366722485 发表于 2015-7-29 22:17
谢倪老师的指点，如果是R3这一群的话，是不是有点太低了？还有就是我楼上贴的这幅图，单纯看foxp3是不是 ...

似乎在flowjo里面显示有问题，所以导致压轴细胞这么多。

你这是什么标本，Treg这个比例还行啊。

366722485 · 发表于 2015-7-30 11:22:44

是脾脏的细胞，用cona刺激72h后检测的。Treg的比例是哪一群，是您说的R3里圈的这一点吗，只有0.41啊？倪老师

366722485 · 发表于 2015-7-30 11:23:16

niwanmao 发表于 2015-7-30 10:26
似乎在flowjo里面显示有问题，所以导致压轴细胞这么多。

你这是什么标本，Treg这个比例还行啊。

是脾脏的细胞，用cona刺激72h后检测的。Treg的比例是哪一群，是您说的R3里圈的这一点吗，只有0.41啊？倪老师

niwanmao · 发表于 2015-7-30 20:47:32

366722485 发表于 2015-7-30 11:23
是脾脏的细胞，用cona刺激72h后检测的。Treg的比例是哪一群，是您说的R3里圈的这一点吗，只有0.41啊？倪 ...

conA只是一个刺激剂，是否能确定肯定使Treg比例增高？

366722485 · 发表于 2015-8-3 21:18:51

niwanmao 发表于 2015-7-30 20:47
conA只是一个刺激剂，是否能确定肯定使Treg比例增高？

谢谢倪老师，目前的实验就是检测加的刺激物能否使TREG比例增高，但是对照组也就是正常的比例也不应该只有这么低吧。

niwanmao · 发表于 2015-8-3 21:28:45

366722485 发表于 2015-8-3 21:18
谢谢倪老师，目前的实验就是检测加的刺激物能否使TREG比例增高，但是对照组也就是正常的比例也不应该只有 ...

有时候，实验结果如此，就得首先确定结果，然后再去找原因。所谓的对照组是否能确定是Treg高的？人的Treg占白细胞0.1~0.7％，小鼠应该相差不会二奶大，而你的标本由于细胞活力欠佳，所以比例低也是很正常的

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[图片] 新手做的Treg流式，请教如何分群