测细胞绝对大小

依果依果

测细胞绝对大小，用微球作标曲，画图时是先画FS/SS，圈住主细胞群，再画FS看平均大小吗？每个微球作一管吧？

Arcrain

不能用散射光看细胞绝对大小！。
不同尺寸的微球，大小差别和FSC信号差别绝对不是线性关系。FSC信号强弱只能反应细胞大小差别的趋势，细胞尺寸相差较大时可以根据判断。如5um和6um的细胞，可能5um细胞的FSC比6um细胞的FSC还大，但10um的细胞FSC信号一定比5um细胞大。
我测过不同大小的微球，在大概好几百纳米尺寸，非常清楚可以看到一种小尺寸微球比尺寸大了100nm的微球信号更高。很可惜U盘坏了后数据找不到了。BD和BC仪器上还会有差别。
标准微球和细胞不一样，微球可以尺寸很小但SSC信号远高于细胞。SSC不反应细胞大小。

niwanmao

检测细胞绝对大小，还是用电镜更合适。流式细胞术的FSC只是一个光散射信号，是一个相对的指标。

chymanhz

测体积要用粒度仪，通过测量可以得到等效散射粒径。如果你的颗粒是圆形，那就等于直径了。 如果你是同一材质同一制造工艺的微粒，你可以用流式细胞仪来判断之间的大小关系，但是你得不到具体的值，因为FSC和直径不是线性的，类似于对数函数。每台仪器收集的FSC角度不一样，具体的曲线也是不一样的。如果是细胞，需要考虑到细胞表面的反射率以及穿透率，这都会影响最终的FSC的大小。因为FSC只收集前向光的一部分角度的光。粒度仪基本上是全角度的收集，而且根据每个角度光的米尔散射数值，通过计算可以得到比如体积平均径、面积平均径、长度平均径、比表面积、中位径等数据。 当然也有其他方法测试体积，比如沉降法测等效沉速粒径，库尔特法所测等效电阻径，图像法所测的等效投影面积径等等。

chymanhz

第一张图就是粒度仪


第二张使用ACEA NovoCyte测试的同一厂家不同直径塑料微球的统计图



第三张是微小直径下的测试数据图

niwanmao

再转发一条迈瑞专业人士的发言：

FSC方向依赖于光学MIe理论，光强和体积呈波浪上升趋势。比较而言，Coulter阻抗原理最能反映体积大小，但需做等体积球形化处理，同时，阻抗法实现上信噪比难度较大，易淹没小细胞。

依果依果

chymanhz 发表于 2015-7-31 17:09
第一张图就是粒度仪

谢谢，很专业的回复

依果依果

新手，发帖子悬赏1流星，怎么发出去啊？@niwanmao

niwanmao

依果依果 发表于 2015-8-1 09:30
新手，发帖子悬赏1流星，怎么发出去啊？@niwanmao

在那个你认为比较好的答案那一楼回帖下，有一个链接可以选为最佳答案，点了之后，你的悬赏就奖励出去了：）