人血液PBMC 免疫细胞分群

dayemulan1988

版主,您好:
         我从学习流式细胞术以来一直看你的帖子,很喜欢.最近实验后点问题,望指导.
         就是我是做在人血液中提取PBMC,然后染色看T细胞分群的.但是我现在的第一步也就是图1中显示:我的白细胞在我整个上样的细胞的比例才10%左右,而小细胞也就是左下角的细胞(应该是红细胞)占80%,我已经是用淋巴细胞分离液提取的PBMC呀,而且我上样的细胞看起来也不红呀,所以很疑惑,你知道怎么样能让白细胞的比例增加,让左下角那群细胞减少吗?感谢哟！！

小憨

最左下角不应该是碎片吗？

路人丙

感觉像是碎片，你可以低转速，多洗两遍试试，或者把阈值调低一点

niwanmao

如无意外，左侧这斜着的80~90％的这部分信号是死细胞和碎片。

dayemulan1988

niwanmao 发表于 2015-8-4 21:28
如无意外，左侧这斜着的80~90％的这部分信号是死细胞和碎片。

哦,谢谢站长,我们是每天中午才能统一去临床拿血,估计要过两三个小时,是不是时间太长就导致状态不好,这么多细胞碎片也是醉了.有什么好办法减少这些碎片和四细胞呢!

dayemulan1988

路人丙 发表于 2015-8-4 15:09
感觉像是碎片，你可以低转速，多洗两遍试试，或者把阈值调低一点

阈值调低一点?你指的是哪个阈值呀?求赐教!!

jing0310

dayemulan1988 发表于 2015-8-5 10:35
阈值调低一点?你指的是哪个阈值呀?求赐教!!

碎片多，不是应该阈值调高一点吗？有点疑惑了

niwanmao

可以考虑根据标记的抗体进行反设门看看细胞的分布位置。

hbezyr

1.ssc电压调低吧。
2.上机前用typan blue看下，是不是有死细胞或是碎片。
3.调fsc阈值（在Diva中有这个选项），把50k以下的去掉。

nixuhao

跟取血的时间没有太大关系，我有时候血都是常温放到下午才做，看看是不是离心的问题。