抗体的保存以及叠氮钠的使用

niwanmao

保存温度和条件

• 未标记荧光素、酶、生物素的抗体
  对于大多数未标记荧光素、酶、生物素的抗体来说，最理想的保存条件为：分装成小包装并冻存于 -20℃  或 -80℃。
  分装可以减少冻融对抗体造成的危害，并减少从一管抗体中多次吸取造成的污染。
  分装的抗体一旦被冻融，剩余的抗体需要被储存在4°C，不能再冻存。
  收到抗体后，建议以10,000 x g离心20秒，将贴在管壁的抗体离心至管底，然后转移到EP管中。
  分装的大小取决于每次实验使用的抗体量。分装体积不能小于 10 µl，因为分装体积越小，抗体保存时的浓度就更容易受到蒸发、管壁粘附等原因影响。
  多数情况下，不含叠氮钠的抗体可以在 4°C条件下保存1~2周，然后再进行冷冻长期保存。抗体包含有蛋白酶的腹水需要立刻冷冻。
• 已标记荧光素、酶、生物素的抗体
  不应冷冻，应保存于4°C。冻融会降低酶活力或促进抗体聚集，影响抗体结合能力。
  结合有荧光素、酶或生物素的抗体，都应该保存于深色管子中或用铝箔纸包裹。暴露于阳光中会影响结合抗体的活性。结合的荧光素尤其容易受光淬灭影响，在实验全程要避光。
  据研究，荧光素标记的诊断性抗体，根据抗体特性不同，保存期限为数周~数年，甚至有学者发现有些诊断性抗体可以保存12~26年之久（Argentieri M, Pilla D, Vanzati A, Lonardi S, Facchetti F, Doglioni C, et al. Antibodies are forever: a study using 12-26-year-old expired antibodies. Histopathology. 2013;63:869-76）。所以我们平时会看到很多过期的抗体仍然可以做出很好的结果，但切记，不是所有的抗体都可以如此，一定要小心、谨慎与正常抗体进行对比、验证。
  

何时用叠氮钠，何时以及如何避免叠氮钠污染
为防止微生物污染，厂家通常将叠氮钠加入抗体制备品，一般终浓度为0.02% (w/v)。


不使用叠氮钠的情形

• 如果用抗体对活细胞进行进行染色或者处理，或用用抗体进行活体内研究，不能使用含叠氮钠的抗体。叠氮钠对大部分生物体有毒，能够干扰色素电子传递系统。
• 叠氮钠会干扰与氨基有关的结合，所以在抗体结合荧光素前应该进行去除叠氮钠。在结合后，抗体可以储存于叠氮钠中，也可以用0.01％硫柳汞作为替代防腐剂。
  

通过渗析或者胶体过滤的方法可以将叠氮化钠去除。
IgG的分子质量为150,000道尔顿 (IgM 为 ~ 600,000），叠氮化钠的分子质量为65道尔顿。
14,000道尔顿的微透析装置可以保留抗体同时使叠氮化物过滤掉。


冻存/融解的损害
反复冻融会改变抗体特性并导致形成聚集物，降低抗体的结合力。