凋亡 FITC染色是不是有问题？！求指导

博库爱跑384

大家好 最近我在做Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，期间遇到一些问题
不知道 有没有凋亡 整群细胞貌似右偏了
阴性对照
单染PI

单染Annexin V-FITC




control



上清

顺铂

上清+顺铂

FITC没有出现像PI那么明显的小峰，峰往右边偏移 正常吗？
说明书说 100微升中含有10^5个细胞，大家都是每个样品都计数，还是说估计一下。六孔板一个孔 我计数了，但是上机后 细胞总是很少？
希望大家指出 小弟的不足！！！谢谢！！！

小小研究生

PI出现小峰，是你把细胞碎片也全进来了吧。PI出现的那个峰有可能是晚凋或者坏死细胞！我觉的你的图形这样没问题，十字门也能够看出趋势。

niwanmao

你的结果没法用十字门精确区分，只能用自己设单独的不规则门来圈，如下图：

博库爱跑384

niwanmao 发表于 2015-8-6 19:44
你的结果没法用十字门精确区分，只能用自己设单独的不规则门来圈，如下图：

...

谢谢倪老师 我想问 我哪里做的不好可能出现这样的结果 还是说细胞的性质就是这样的？

wangjijun

倪老师，我们也遇到类似的问题，对照组十字门圈好后，在做实验组时，FITC群也是偏移的，需要调整A5的电压吗，还是按您的方法不规则圈门？

niwanmao

博库爱跑384 发表于 2015-8-6 23:17
谢谢倪老师 我想问 我哪里做的不好可能出现这样的结果 还是说细胞的性质就是这样的？ ...

细胞种类、染料、操作都可能有关系

niwanmao

wangjijun 发表于 2015-8-6 23:33
倪老师，我们也遇到类似的问题，对照组十字门圈好后，在做实验组时，FITC群也是偏移的，需要调整A5的电压吗 ...

跟很多因素有关，如果不同种类细胞都是如此，可能就是染料问题，要换靠谱的公司。

轩辕河图

倪老师，这位站友的不规则分群会不会是因为补偿调节不合适引起的呢。

niwanmao

轩辕河图 发表于 2015-8-9 19:54
倪老师，这位站友的不规则分群会不会是因为补偿调节不合适引起的呢。

还不知道补偿值如何，是有可能的，但不会完全由补偿引起。

wendyfish126

倪老师你好，我做的双染凋亡图跟楼主类似，但只有下面红色那群细胞，只有这一群，但是药物作用后明显有FITC+（LR象限）偏移，也有FITC+/PI+(即UR象限)偏移。我做的是神经瘤细胞SH-SY5Y，试剂盒是DOjinDO的AnnexinV,FITC凋亡检测试剂盒，补偿设置为FL2-30%FL1。请教老师是怎么回事，谢谢老师。