小鼠血小板活化检测

RIVA

目前我正在做小鼠血小板活化实验，用的抗体是CD41/CD62P/AV,我用41圈血小板，62p看晚期活化，AV看早期活化。但是AV染色必须要BINGDING BUFFER,才能染上，但是它会影响血小板的聚集。请问各位大神，有没有什么方法解决此问题？
1、能不能有替代AV的？
2、如何解决血小板聚集带来的圈门影响？
3、如何解决血小板活化检测中红细胞的影响？

niwanmao

血小板活化我倒是没做过，但是之前翻译过的protocol：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3905-1-1.html 是用CD62P和PAC-1检测活化的。
Annexin V检测早期活化我估计原理就是血小板活化后胞膜发生改变，那样的话，可能应该没有其它标记可替代了。

至于解决血小板聚集和活化造成的圈门影响，刚才那个protocol应该可以帮助一下你吗？

RIVA

niwanmao 发表于 2015-8-7 22:39
血小板活化我倒是没做过，但是之前翻译过的protocol：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3905-1-1.html 是 ...

我看过您说的那个protocol，那个是人的外周血血小板活化的检测。我做的是小鼠的，小鼠没有PAC-1吧？！

niwanmao

RIVA 发表于 2015-8-28 13:37
我看过您说的那个protocol，那个是人的外周血血小板活化的检测。我做的是小鼠的，小鼠没有PAC-1吧？！ ...

1、AV目前看来是没有办法替代的。
2和3统一回答：FSC和SSC设门在血小板量少或者发生聚集时比较困难，但在活化时，血小板有可能在FSC、SSC上与红细胞发生重叠，故FSC、SSC设门主要用于排除碎片和背景噪音。为了排除粘连血小板，可将非活化相关的标记（如CD61）结合SSC设门排除

你们课题设计时肯定有参考文献，可以参考那些文章中的protocol。

RIVA

niwanmao 发表于 2015-8-30 21:58
1、AV目前看来是没有办法替代的。
2和3统一回答：FSC和SSC设门在血小板量少或者发生聚集时比较困难，但在 ...

好的，感谢~

xiaotong

楼主，请问您是小鼠全血做的吗，能参考一下您的实验步骤吗，跪谢！

刘传隆

xiaotong 发表于 2018-12-9 21:15
楼主，请问您是小鼠全血做的吗，能参考一下您的实验步骤吗，跪谢！

请问您现在搞到了小鼠全血做PLT的实验步骤吗？跪求了