八色流式如何补偿？

爱白衣杀手

做肠道淋巴细胞八色标记。发现补偿极难。我先用血液淋巴细胞染色补偿感觉做得比较稳定了。图也不错。上了肠道消化的免疫细胞后图立马变形。伤透脑筋，请各位高手支招。让我不解得是消化的原代细胞死亡的细胞很多，有很强的非特异性荧光，这些非特异的信号不用补偿吧？也补偿不掉吧？

小憨

肠道细胞就是这么奇葩，我还测到过CD3和CD19双阳性细胞呢，别的老师就说我的补偿没调好，可是我是用补偿微球调的，同样条件做脾脏细胞完全没问题，可见肠道细胞有它自己的特点，有自发荧光的影响，但是它的相关指标marker的表达也跟传统的淋巴细胞不一样，比如肠道中有CD4CD8双阳性细胞，这些都是肠道免疫细胞的特点，分析的时候不能根据自己的经验来判断了。

小憨

突然想到，如果是自发荧光的话，可以跑一管什么都不染的，看看哪个通道有自发荧光，然后在补偿矩阵里调掉。

kermit

建议用Aria II 让计算机程序计算调~详见机器用户指南。

爱白衣杀手

小憨 发表于 2015-8-25 15:34
肠道细胞就是这么奇葩，我还测到过CD3和CD19双阳性细胞呢，别的老师就说我的补偿没调好，可是我是用补偿微 ...

请问微球的补偿效果好吗？说是补偿与电压和荧光相关，我怎么觉得换了细胞补偿也变了啊，那微球岂不是更不准确？能分享一下经验吗？

爱白衣杀手

kermit 发表于 2015-8-25 16:44
建议用Aria II 让计算机程序计算调~详见机器用户指南。

我用的VERSE。也可以吗？没了解过这个。

小憨

爱白衣杀手 发表于 2015-8-25 16:54
请问微球的补偿效果好吗？说是补偿与电压和荧光相关，我怎么觉得换了细胞补偿也变了啊，那微球岂不是更不 ...

补偿是荧光素的补偿啊，所以用微球不能排除自身荧光的干扰。

Arcrain

最好还是用样本细胞做单阳性对照进行补偿。
如果说你的细胞有的mark表达低，阳性信号太弱不能准确调补偿，你可以换成同荧光素的其它高表达表面抗原的荧光抗体，在同一个检测通道检测，再做补偿。或者，也有干脆就用同一种高表达的抗原，然后用该抗原的不同荧光素的抗体来做补偿对照。
补偿微球不是万能的，它与不同类型细胞的自发荧光水平不可能一样。另外，对某些荧光素不能得到足够好的补偿值。