新手求助 外周血免疫细胞分群 问题

静如水

各位老师好！

我是一只刚开始实验的科研菜鸟，最近在做人外周血免疫细胞分群，遇到很多问题，希望老师们能帮我指点迷津。

图片一是我得到的外周血FSC vs SSC 的分群结果，与我再书上及网上看到的分群不一样，我重复做了几次，都是这样的结果，不知问题在哪？

我想分析的是外周血中的不成熟髓系细胞，文献上说可以用CD14-CD11b+CD33+来设门分析，但是其实这样得到的是一大群中性粒细胞（如图2,3）

另外，HLA-DR分子表达在单核巨噬细胞，DC，B细胞，活化的T细胞及其他非专职抗原提成细胞，我的HLA-DR vs SSC 分析结果如图4，不知道结果是否正确？？

望老师们批评指正，非常感谢！

niwanmao

1、细胞是否保存时间过长，导致死亡太多？
2、CD14－CD11b+CD33+这个方案来区分不成熟髓系细胞是不正确的。如果你要检测干祖细胞，那么建议再加CD34。
3、HLA-DR的分群基本上还靠谱吧。

静如水

niwanmao 发表于 2015-8-26 13:15
1、细胞是否保存时间过长，导致死亡太多？
2、CD14－CD11b+CD33+这个方案来区分不成熟髓系细胞是不正确的。 ...

我是早上取的血，大概放了两小时左右开始裂红，染色，下午上机测流式。做了几次都是这样的结果，老师是觉得淋巴细胞左上方那一群细胞都是死细胞吗？我单独把这一群细胞圈出来分析发现，这群细胞有淋巴细胞，中性粒细胞和单核细胞，如果这群细胞是死细胞的话，那就是我的单核细胞都没有了？！

niwanmao

静如水 发表于 2015-8-26 17:07
我是早上取的血，大概放了两小时左右开始裂红，染色，下午上机测流式。做了几次都是这样的结果，老师是觉 ...

处理后固定了吗？

静如水

没有固定

静如水

niwanmao 发表于 2015-8-26 23:37
处理后固定了吗？

图上这些样本都没有固定，
我有试过固定的，那个分群更奇怪。

niwanmao

静如水 发表于 2015-8-28 15:59
图上这些样本都没有固定，
我有试过固定的，那个分群更奇怪。

用什么流式细胞仪？

无事可乐

niwanmao 发表于 2015-8-26 23:37
处理后固定了吗？

倪老师好，请问如何做固定？所有样品处理都需要固定吗？谢谢您

飞翔

无事可乐 发表于 2022-3-3 21:41
倪老师好，请问如何做固定？所有样品处理都需要固定吗？谢谢您

直接检测就不需要固定，染完之后隔天检测就需要固定了，还有检测胞内的需要固定

无事可乐

飞翔 发表于 2022-3-4 13:02
直接检测就不需要固定，染完之后隔天检测就需要固定了，还有检测胞内的需要固定 ...

谢谢您的回复，学到啦～