分析研磨法制备小鼠单细胞悬液的检测数据

向前

大家好，我这里有三个问题想要请教大家
           1）第一，第二幅图中的标记过的抗体怎么会有两个峰呢？散点图显示的也是一种细胞状态呀。
           2）第三幅图中的荧光强度都要超过阈值了，怎么会有这种情况呢？
           3）第四，第五幅图是相同的一抗，只是二抗荧光标记不是一种，为什么单独二抗的荧光强度（蓝色曲线）也会那么高呢？而且AF647标记的二抗检测一抗就会有特异性结合，用PE标记的二抗就没有特异性结合呢？我实验室封闭时用10%山羊血清，室温封闭10分钟后直接加二抗的。上机前也洗涤了两遍的。所有的操作都是一样的。为什么结果差那么多呢？
@niwanmao 谢谢啦！@niwanmao

niwanmao

1、这样的所谓双峰不用太在意，可能是一种细胞异质性的体会，实际上严格来说不能算双峰表达。

2、这种超出坐标的表达可能性主要有：
（1）抗体未滴定；
（2）抗体非特异性结合能力过强；
（3）细胞粘连；

3、看不到你的数据及其设门，不好评论。