A549和A549/DDP细胞株的P-gp检测圈门问题

eyre922

各位老师好，我检测A549和A549/DDP细胞株的耐药蛋白P-gp，但是在圈细胞群时有两群，我不知道怎么圈。见PDF附件，我圈了如图一群，但是好像耐药株和不耐药株的蛋白表达没什么变化，如果把两群都圈上，好像就有了区别，尤其是后面的图（A10D）给细胞施加顺铂（DDP）后，好像细胞群也分不开了，所以我想请教一下：
1、我目前圈的门是否合适？
2、右侧直方图应该把对照A549或者A549/DDP圈进门还是排除出门？
不好意思，我忘了设不染色的阴性组。我主要想了解一下圈门的方法。谢谢大家了。

20150827-01
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODcxMnw5ODAxNmYyMHwxNzQwMzk5MTAyfDB8


20150827-02
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODcxM3wwMjkyODkxZHwxNzQwMzk5MTAyfDB8


20150827-03
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODcxNHw5YjA0MDgxMHwxNzQwMzk5MTAyfDB8

niwanmao

加高浓度顺铂的几个标本，尤其是A10D这个标本，FSC/SSC中两群细胞分不开，说明细胞死亡太多，门左侧基本上都是死细胞，死细胞会导致明显的非特异性染色，所以你右侧的直方图可看到阳性峰出现，这是假阳性。

建议：
1、能否确定细胞死亡是顺铂浓度问题还是标本处理过程中的问题？如为顺铂浓度过高，是否可降低顺铂浓度？
2、marker的位置还是需要根据未加药细胞来设置的。

eyre922

niwanmao 发表于 2015-9-2 09:04
加高浓度顺铂的几个标本，尤其是A10D这个标本，FSC/SSC中两群细胞分不开，说明细胞死亡太多，门左侧基本上 ...

谢谢倪老师，您的意思是我的门圈的是合适的？那A549和A549/DDP的图中（不施加因素）FSC/SSC中左侧一群也是大量的死细胞？那我的消化可能就有问题了。我还想请教一下，检测p-gp多糖蛋白时消化细胞能不能用含有EDTA的胰酶，谢谢

niwanmao

eyre922 发表于 2015-9-4 20:00
谢谢倪老师，您的意思是我的门圈的是合适的？那A549和A549/DDP的图中（不施加因素）FSC/SSC中左侧一群也 ...

可以调整一下胰酶消化的时间、浓度看看，每种细胞最佳消化条件都不同。