求助 NK细胞

xuexuqiong

各位老师好，本人新手一名，想请各位老师帮忙看一下图中E1门的左侧的那一群是什么东西？是什么原因造成的？细胞在显微镜下长的很好，但测出来的CD3-CD16+CD56+所占比例不是很理想，是试剂用的不对吗？谢谢！

niwanmao

首先，E1门左侧大量碎片，或许为处理时导致细胞破碎，所以上机前可以再镜下观察一下试试，需要找到使细胞破碎的原因。
其次，建议把CD3/CD56+CD16这个图分群不是很清楚，但还是可以这么设的。

xuexuqiong

niwanmao 发表于 2015-10-8 08:16
首先，E1门左侧大量碎片，或许为处理时导致细胞破碎，所以上机前可以再镜下观察一下试试，需要找到使细胞破 ...

倪老师，您好，该样本上机前，曾多次离心，是否是造成碎片多的原因？收集细胞时离心机的转速以及时间分别是多久比较好？另外我不是很懂第二张图的作用是什么？当初流式的老师教的时候说画第二张图是为了分辨CD3的阴阳性。但是NK细胞表达的是CD3-CD16+56+，我们需要的应该是CD3-呀，为何要去圈CD3+的细胞群？打了这么多，也不知是否表达清楚了我的意思，还望老师多多指教，谢谢！

niwanmao

xuexuqiong 发表于 2015-10-8 22:22
倪老师，您好，该样本上机前，曾多次离心，是否是造成碎片多的原因？收集细胞时离心机的转速以及时间分别 ...

NK一般是CD3－CD56+的，但存在少量NKT是CD3+CD56+的。
主要你这样的细胞状态，会存在很多非特异性染色，建议首先保证细胞活力，然后才能保证结果。