不一样的荧光标记的同一抗体散点图差异怎么那么大？

shaner-ok

各位怎么看这种差异？我想把CD19圈起来，第一幅还可以，第二副怎么办呢？

niwanmao

这就说明了为什么我们挑选抗体的时候要看它的克隆号、荧光素。

第二幅图说明了PC5.5的CD19没法有效区分CD19dim和CD19－的细胞，这原因有二：
1、抗体本身问题。
2、附近荧光素干扰的原因，如果你是多种荧光素一起标记，这个原因首先要考虑。

mxc0712

Mark一下，学习了...抗体已经买来在做了，但愿我的实验没有这个问题...

shaner-ok

谢谢倪老师的点评，再来分析这两张图（两个测试管），第二图似乎更倾向于APC荧光的干扰？是补偿没调好？Percp－Cy5.5减APC值调的太少吗？各抗体图中有显示。

niwanmao

shaner-ok 发表于 2015-11-10 18:35
谢谢倪老师的点评，再来分析这两张图（两个测试管），第二图似乎更倾向于APC荧光的干扰？是补偿没调好？Per ...

不排除CD19 PC5.5发生荧光素分解的可能性。

shaner-ok

niwanmao 发表于 2015-11-10 19:40
不排除CD19 PC5.5发生荧光素分解的可能性。

谢谢倪老师！这是BD公司的抗体，也会存在荧光素分解？

niwanmao

shaner-ok 发表于 2015-11-10 21:06
谢谢倪老师！这是BD公司的抗体，也会存在荧光素分解？

这跟哪个公司生产无关，跟串联荧光素的特性有关。当然，也不排除抗体质量问题，但这种质量并不一定是公司特定为之，而是由于选择的克隆号不同、位点不同引起。