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“反设门”究竟是什么?

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发表于 2015-11-10 20:20:10 | 显示全部楼层 |阅读模式

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平常,经常会碰到一些在FSC/SSC或者其它散点图上分群不清的情况,这时,如何圈中目的细胞而不会将干扰细胞选进去,对于分析结果准确与否十分关键。如果你在其中加入了某个特异性的标记能够选出该类细胞,那么采用“反设门”(backgating)是个靠谱的方法。

其实以前论坛上很多FLOWER也都问过究竟什么是“反设门”,费尽口舌,但还是应该有不少新手不了解,所以在此结合图形解释一下“反设门”的概念。

先看下面这个图,箭头指向代表我们要解释的顺序,A图是未设门的散点图(此处SSC采用了LOG,可能有些站友看不惯,没关系,其实LOG只是把几群细胞的间距拉近了、压扁了,分布还是一样的),从A图可看出,淋巴细胞和单核细胞分群不是特别清,其中稍微有点交叉在一起,此时,我设淋巴细胞的门应该边界怎么设置可以防止单核细胞的干扰呢?
屏幕快照 2015-11-10 下午7.57.48.jpg


对了,就是反设门,B图开始就是反设门的步骤,首先选择CD45高表达并且CD14阴性的细胞,设为P1门,门内就是很纯粹的淋巴细胞了,将P1门内细胞显示在FSC/SSC散点图上,可以看到,确实淋巴细胞有些拖尾拖到单核细胞区域内,于是我们就知道了,要避开那些零零散散的拖尾,选择单纯的淋巴细胞群体,设为P2。再去看P2门内的细胞,就能够看到P2门内的细胞是很纯的淋巴细胞,只有0.3%的单核细胞干扰。


聊到这里肯定又有站友要问了,这样圈不是损失一些淋巴细胞信号了吗?确实会损失,但是比较少。另外,其实我们还可以利用CD45/SSC很好地区分开淋巴细胞和单核细胞。但是我们今天其实不是讨论淋巴细胞的设门方法,只是借此案例,告诉大家什么是“反设门”,反设门是怎么用的,怎么来帮助我们来选择更纯的目标细胞,仅此而已。☰☱
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发表于 2015-11-11 10:20:41 | 显示全部楼层
每日一学{:soso_e179:}
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发表于 2016-7-5 15:44:43 | 显示全部楼层
老师好,那P1门根据什么来确定p1门应该设置在上图位置,谢谢
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 楼主| 发表于 2016-7-5 18:13:35 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2016-7-5 15:44
老师好,那P1门根据什么来确定p1门应该设置在上图位置,谢谢

这里的P1是CD45高表达而CD14-的细胞,就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern,圈好之后,看看淋巴细胞在哪个位置,再群新的门。
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发表于 2016-7-6 14:24:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-5 18:13
这里的P1是CD45高表达而CD14-的细胞,就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern,圈好之后,看看淋巴细胞在 ...

刚开始学习这方面的知识,有许多不懂的地方望不吝赐教,非常感谢老师解答
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发表于 2016-7-7 11:25:13 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2016-7-6 14:24
刚开始学习这方面的知识,有许多不懂的地方望不吝赐教,非常感谢老师解答 ...

老师您好,流式图的十字门怎么确定,确定的标准和依据是什么,有的是正中央,有的是偏左或偏右,还有偏上偏下的,有点迷糊,望老师,非常感谢
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发表于 2016-7-7 11:25:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-5 18:13
这里的P1是CD45高表达而CD14-的细胞,就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern,圈好之后,看看淋巴细胞在 ...

老师您好,流式图的十字门怎么确定,确定的标准和依据是什么,有的是正中央,有的是偏左或偏右,还有偏上偏下的,有点迷糊,望老师,非常感谢
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 楼主| 发表于 2016-7-7 20:32:47 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2016-7-7 11:25
老师您好,流式图的十字门怎么确定,确定的标准和依据是什么,有的是正中央,有的是偏左或偏右,还有偏上 ...

参见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5268-1-1.html
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发表于 2017-7-13 20:00:29 | 显示全部楼层
老师您好,如何使圈好的门内细胞改变颜色。还有C到D操作上是如何实现的?我使用的是flowjo软件,谢谢!
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