流式分选问题

972676742

各位老师：
       最近在做流式分选的时候发现如果细胞是连续性表达的情况下分选出来的细胞不是很纯，有解决的恶方法吗？还是对于这种连续性表达的样本，分选只能提高阳性率，无法将阴性细胞去除？

niwanmao

抗原表达弱，阳性和阴性细胞分不开，确实是流式分选的一大挑战，没有直接的办法。但可以考虑用其它能够分得开的指标来分选，曲线救国。一种细胞不可能只有一个指标。

972676742

我们是做稳定细胞系，转染目的质粒后想要分选到阳性表达的细胞，似乎没有其他指标可选了？有时候分选出来回测后数据还和未分选之前的一样的。这种情况是不是和分选有关？

niwanmao

972676742 发表于 2015-11-16 16:17
我们是做稳定细胞系，转染目的质粒后想要分选到阳性表达的细胞，似乎没有其他指标可选了？有时候分选出来回 ...

转染的话按道理都应该很强才对的啊。是不是转染效率不好？

972676742

嗯，是的，就是因为转染后阳性率低才希望做分选得到阳性表达的细胞。

niwanmao

972676742 发表于 2015-11-17 08:47
嗯，是的，就是因为转染后阳性率低才希望做分选得到阳性表达的细胞。

这样我觉得只能通过改进转染体系，提高转染效率了。因为流式对分群不好的细胞分选效果欠佳，这是原理决定的，其它方法也是类似。

972676742

倪老师，流式对分群不好的细胞分选效果不好的原因到底是什么现在有相关的答案吗？

niwanmao

972676742 发表于 2015-11-17 09:08
倪老师，流式对分群不好的细胞分选效果不好的原因到底是什么现在有相关的答案吗？ ...

打个比方吧，流式分选有点象工人分捡装球的盒子。

如果是人，你要求他从一堆3个球的盒子里面分出含5个球的盒子，尽管差距不大，但他会认真数，所以确实一个个都分开了。

但流式仪器却没法做到这么智能化，它们能够判断一定范围，例如你让它从一堆含3个球的盒子中分出含10个球的盒子，它会自动识别8－12个球的盒子，所以分选效率几乎100％，但如果你让它去分含5个球的盒子，那么它依然会自动识别3－7个球的盒子，于是就把3个球的盒子也分在一起了，最后你得到的标本跟原理是差不多的。

Arcrain

建议你每次分选完毕，取出一部分分选得到的细胞在同一台仪器上上样检测一下，看看分选纯度。

972676742

Arcrain 发表于 2015-11-17 09:39
建议你每次分选完毕，取出一部分分选得到的细胞在同一台仪器上上样检测一下，看看分选纯度。 ...

恩，这个我们每次分选后都会做的