Fc blocker的使用

bullfoo

按照BD 的protocol进行流式细胞染色在染胞外之前都会加Fc blocker进行预处理，请问Fc blocker是不是必须的呢？是不是看髓系来源的细胞的时候才需要加用呢？ 另外Fc blocker有分种类的吗？ 谢谢各位大侠

niwanmao

如果你的抗体存在较明显的Fc片段非特异性结合，或者同型对照比空白管要高很多时，才要求使用。否则，可以用，也可以不用。

bullfoo

niwanmao 发表于 2015-12-3 19:05
如果你的抗体存在较明显的Fc片段非特异性结合，或者同型对照比空白管要高很多时，才要求使用。否则，可以用 ...

谢谢倪老师的回复，“同型对照比空白管要高很多”这个我明白，“抗体存在较明显的Fc片段非特异性结合”这个是如何来判断的呢？

niwanmao

bullfoo 发表于 2015-12-3 22:17
谢谢倪老师的回复，“同型对照比空白管要高很多”这个我明白，“抗体存在较明显的Fc片段非特异性结合”这 ...

主要还是看图形。可以这么说吧，如果你能够确定标本细胞状态很好，肯定阴性，但是图形上很明显的非特异性荧光，这个时候需要考虑会不会是Fc片段原因。

zhang65103

niwanmao 发表于 2015-12-4 20:14
主要还是看图形。可以这么说吧，如果你能够确定标本细胞状态很好，肯定阴性，但是图形上很明显的非特异性 ...

老师 ，在染色前加1%BSA作用和FC blocker一样么

niwanmao

zhang65103 发表于 2015-12-5 16:42
老师 ，在染色前加1%BSA作用和FC blocker一样么

类似，相对来说Fc Blocker更特异，效果可能更好。

小憨

niwanmao 发表于 2015-12-6 14:43
类似，相对来说Fc Blocker更特异，效果可能更好。

同意，BSA与抗体分子都是球蛋白分子，会与其他生物分子产生非特异性吸附，造成抗体结合的非特异性，这种结合并不牢固而且发生的频率低；而抗体的Fc段与CD16/32（也就是Fc受体）的结合是特异性的，而且结合牢固。所以用BSA和Fc blocker都叫“封闭”，但其实原理还是不一样的

mcdfish

niwanmao 发表于 2015-12-6 14:43
类似，相对来说Fc Blocker更特异，效果可能更好。

老板说可以加同种来源的血清进行封闭，比如鼠抗牛的inf-γ，就要用鼠的血清封闭，是这样吗？用的话要多少的量？

niwanmao

mcdfish 发表于 2016-4-6 13:21
老板说可以加同种来源的血清进行封闭，比如鼠抗牛的inf-γ，就要用鼠的血清封闭，是这样吗？用的话要多少 ...

是的，用同种血清可以，我个人觉得一般50ul～100ul就够了。

mcdfish

niwanmao 发表于 2016-4-6 13:42
是的，用同种血清可以，我个人觉得一般50ul～100ul就够了。

一管100ul的细胞加50-100ul？是不是多了点，您有个帖子上面说加1%，我加了1ul鼠的血清，感觉没什么效果。