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悬赏1流星未解决
各位老师好, 我学流式时间不长,主要做科研的,也只会一些简单的操作,这次实验涉及CD44/CD24两个肿瘤干细胞标记,加药物刺激后啊看表型变化,但该药物本身带荧光, 并且对I,II,III通道都有影响,比较复杂.
这里把我实验里碰到的问题总结一下,请教一下各位老师,望指教,谢谢!
抗体用的是CD44-FITC, CD24-APC,(特意选择波长差比较远的抗体,干扰会小一些) ,仪器是BDcaliur
第一个问题是以前实验也用的BDcalibur的机器，调节FSC用的电压是E00，不知道为什么换这台机器同样型号FSC必须用E-1才能出细胞群，E00很多细胞压线，没法调到图中央，就是普通的MCF7细胞有很大的大小差别吗？
这是FSC/SSC图，用E-1， 不知道怎么做有没有问题？
第二个问题是调节空白补偿的问题，我用的空白细胞调电压，希望可以大部分空白在10^ 0-10^ 1之间, 结果FL1-FL4双标图细胞群比较好看，FL1-FL2图的空白细胞群成一条直线，（药物荧光对第一通道有干扰，所以也设置了药物单染组调节第一通道的补偿，不过后来发现低浓度的药物干扰不大），但是不知道空白细胞成直线是怎么回事？
第三个问题是，空白我已经尽量压到10^ 0-10^ 1之间了，再减大部分空白就压线了，结果CD24APC组细胞阳染很明显，部分细胞都压上线了，这怎么办，该做抗体滴定吗？还是我设置的问题，而且APC第四通道应该对一，二通道无干扰吧，结果我这个APC单染的好像对二通道有干扰？
最后附上实验时的调节设置，望各位老师指导，谢谢！第一次做三色荧光，也不知道对不对。
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发表于 2015-12-20 21:20:20
发表于 2015-12-21 21:01:11