找一种靠谱的破膜剂，难！

niwanmao

@以梦为x马   站友在http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4888-1-1.html帖中问破膜后死细胞所在位置的时候，贴出了两张破膜剂处理后的FSC/SSC散点图。

下图是破核膜的破膜剂处理后的FSC/SSC散点图，可见其中的活细胞在69.9％（虽然没完全圈进，但差得不是很多），左侧均为碎片。


下图是胞膜的破膜剂处理后的FSC/SSC散点图，其中的活细胞47.2％，左侧碎片和死细胞。



在此，我们重点不是讨论哪种好哪种不好，而是平时我们在做免疫分型的时候，其实也深深感觉到要找一种对抗原表达和细胞形态均不产生影响的破膜剂几乎不可能，很多破膜剂对CD45/SSC散点图的细胞群分布影响很大，尤其是小群细胞时，当然我们知道这是由于破膜剂本身的原理造成的。所以只能在各种破膜剂中，寻找一种靠谱的、对抗原影响尽量小、对物理参数影响尽量小的。

Zahra等人对比过Tween-20、Triton X-100、NP-40、蛋白酶K、链球菌溶血素O、皂素等在检测贴壁细胞18S RNA中对细胞FSC/SSC的影响，发现还是Tween-20最好，皂素次之，而其它影响较明显。

不知道各位FLOWER在日常科研和临床检测中有什么感觉比较理想的，对FSC/SSC和抗原表达影响小的破膜剂可以推荐呢？欢迎跟帖。



数据和图片来源：Zahra Amidzadeh et al. Assessment of Different Permeabilization Methods of Minimizing Damage to the Adherent Cells for Detection of Intracellular RNA by Flow Cytometry. Avicenna J Med Biotechnol. 2014 Jan-Mar; 6(1): 38–46.

小憨

我做细胞因子的染色都是用的foxp3的破核膜的破膜剂，感觉比专做细胞因子的破膜剂效果好，容易出结果。

各输己键

个人感觉，eBioscience的似乎好使一些。

小卡的口哨

小憨 发表于 2015-12-29 08:16
我做细胞因子的染色都是用的foxp3的破核膜的破膜剂，感觉比专做细胞因子的破膜剂效果好，容易出结果。 ...

你好 请问您用的是哪个牌子的破核膜的破膜剂呢 染的是哪些细胞因子呢