新手求助：荧光微球测吞噬能力

HollyHuang

[新手求助]
各位老师、朋友：实验研究的是环境因素（低PH、暴露于二氧化钛）对贝类血淋巴细胞吞噬能力的影响，用的yellow-green fluorescent FluoSpheres® beads(改性羧酸微球)，由于刚接触流式，问题如下：
1、对于区分碎片颗粒有疑惑？（是不是在fsc-ssc图表中处于左下角靠近坐标的基本上可以判断为碎片呢？）
2、用FSC-A/SSC-A还是FSC-H/SSC-H找目标细胞群呢？
3、关于数据处理，有相关文献说以细胞吞噬了三个或者三个以上的荧光珠评估细胞的吞噬功能，以百分比或者荧光强度为评价标准。
     在我的数据中

实验组

我所标记的M1是否可以表示吞噬了三个或者三个以上的荧光珠的部分呢？
4、还有的相关文献用每个血细胞吞噬的荧光珠来表示吞噬功能，此种数据应该怎样得出呢？

谢谢各位，感激不尽。

niwanmao

第一篇中文文献没有说清楚如何判断吞噬了三个或三个以上的荧光微球，第二篇外文文献似乎没说必须要三个或三个以上。
我是这么想的，应该是直接比较不同实验环境下，吞噬了微球的细胞，荧光强度强弱比较一下就可以了，是否吞噬了三个，没有做标准曲线不可能确定出来的。

HollyHuang

niwanmao 发表于 2016-3-18 13:39
第一篇中文文献没有说清楚如何判断吞噬了三个或三个以上的荧光微球，第二篇外文文献似乎没说必须要三个或三 ...

谢谢倪老师，是的，第二篇英文文献是没有说必须要三个或者三个以上，它是用每个血细胞平均吞噬的荧光珠来表示吞噬功能，这种方法应该怎么确定数据呢？
另外，标准曲线的做法我可以在哪里得到参考呢？

谢谢回答，感激不尽

HollyHuang

niwanmao 发表于 2016-3-18 13:39
第一篇中文文献没有说清楚如何判断吞噬了三个或三个以上的荧光微球，第二篇外文文献似乎没说必须要三个或三 ...

A phagocytic indexwas measured as the percentage of cells that had ingested three or more fluorescent beads. The phagocytic capacity of hemocytes was also measured as the mean number of engulfed beads within the phagocytic hemocytes population. 倪老师 我又仔细看了一遍 在英文的文章里面 他也提到要吞噬三个或三个以上，除了这个办法，还有另外用每个血细胞平均吞噬的荧光珠来表示吞噬功能的办法。
被这个问题困扰已久，谢谢帮助。

niwanmao

HollyHuang 发表于 2016-3-18 14:50
A phagocytic indexwas measured as the percentage of cells that had ingested three or more fluoresc ...

白天看得比较粗，现在仔细看了下，再分析了你的数据，感觉其实所谓的3个荧光微球就是指那些与阴性区域分开比较远的细胞（如下图），你的结果非常好啊，你看，阳性区域分了很多峰，代表了吞噬了不同数量微球的细胞，太漂亮了。点个赞。

wqlh168

你不能调节下电压吗，FL1通道的荧光强度都已经超出FL1荧光右边界了，调节后结果会更好吧

chymanhz

wqlh168 发表于 2016-3-18 23:57
你不能调节下电压吗，FL1通道的荧光强度都已经超出FL1荧光右边界了，调节后结果会更好吧 ...

用的应该是C6，不能调电压

wqlh168

chymanhz 发表于 2016-3-20 13:21
用的应该是C6，不能调电压

哦，谢谢，不太懂，没用过这种不能调电压的，但感觉还是能调节电压的高级多了，呵呵

chymanhz

wqlh168 发表于 2016-3-26 11:11
哦，谢谢，不太懂，没用过这种不能调电压的，但感觉还是能调节电压的高级多了，呵呵 ...

调节电压和高级没有直接联系，C6如果把PMT增益开放给客户，客户也可以调电压了。

wqlh168

chymanhz 发表于 2016-3-26 11:46
调节电压和高级没有直接联系，C6如果把PMT增益开放给客户，客户也可以调电压了。 ...

哦，那这种没有开放调节电压的仪器和我使用的能调节电压的仪器，在实验中有啥区别吗？疑惑了