关于流式检测CD分子阳性表达结果的疑问

何子

如题，进行的是对CD分子阳性表达的检测。主要是看该基因上调后，对CD分子阳性比例的影响。流式主要分组，阴性对照组（不加抗体进行检测）、同型对照组、空载质粒组和过表达组（转染某基因上调的质粒），进行流式检测。现在的主要疑问是，我的同型对照组的阳性比例很小，而空载组和过表达组的比例较高，这种差异是正确的结果吗？谢谢指导。

INTORNS

本来就是以同型对照组为参照标准，判断空载组和过表达组中CD分子的表达比例。所以同型对照组中的阳性比例很低是正常的吧。

何子

INTORNS 发表于 2016-3-20 14:27
本来就是以同型对照组为参照标准，判断空载组和过表达组中CD分子的表达比例。所以同型对照组中的阳性比例很 ...

嗯 我也是这么认为的，  同型对照的作用只是用来规避抗体等非特异性因素对于表达比例的影响，我查了一些文献，发现做单标记物检测的，好多都没有给出同型对照的结果或者图片。只是实验汇报的时候，同门的师姐对同型对照和空载组的比例差异大表示质疑，她认为同型对照应该和空载组测出的数值应该基本是一样的。。。叫我加一个不转染空载质粒的细胞加CD的流式抗体来测一下、、、我表示疑惑。老师您觉得这该怎么去解释？

niwanmao

何子 发表于 2016-3-20 16:33
嗯 我也是这么认为的，  同型对照的作用只是用来规避抗体等非特异性因素对于表达比例的影响，我查了一些 ...

空载质粒正常情况下是否表达该CD分子？

何子

niwanmao 发表于 2016-3-20 20:05
空载质粒正常情况下是否表达该CD分子？

哦，老师，空载质粒是pIRES2-EGFP-NC，我还没有查过相应的文献的。我有个疑问，比如说我检测一个细胞的表达情况，同型对照和该单纯这个细胞CD分子阳性比例的结果相近吗？

niwanmao

何子 发表于 2016-3-20 21:08
哦，老师，空载质粒是pIRES2-EGFP-NC，我还没有查过相应的文献的。我有个疑问，比如说我检测一个细胞的表 ...

如果空载质粒确定不表达该CD分子的话，两者应该是接近的。