如果抗体孵育时间过长，会发生什么事？

niwanmao

从一开始接触流式，protocol就告诉我们：室温下抗体孵育15分钟后，进行洗涤或者裂解红细胞。久而久之，这已经成了习惯。但是，如果我们在抗体孵育时，忘记了定时，或者忙于其实事情一时无法脱身，造成孵育时间过长，会怎么样呢？
室温 下，我曾经测试过，延长到30分钟～1小时问题不大，但如果时间继续延长，会发生什么情况？请看下面两张图片。

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不过，以上测试均在室温、PBS孵育环境下进行，据国外有FLOWER反映，在4度或冰上孵育过夜，或者在含1％BSA的PBS中孵育不会导致这种非特异性染色增强的情况。对此，我个人表示没测试过，但还是建议孵育时间不要长得太离谱。
如果各位FLOWER做过什么测试，可以在本帖后跟帖回复。

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aya9988

又有了新的收获，这里真是一个大宝藏，台感谢倪老师了。
倪老师，溶血素为什么要室温放置呢？溶血时间多少为宜呢？溶血时间过长的话会有什么样的后果呢？

niwanmao

aya9988 发表于 2016-4-14 10:57
又有了新的收获，这里真是一个大宝藏，台感谢倪老师了。
倪老师，溶血素为什么要室温放置呢？溶血时间多少 ...

如果是自配的氯化铵溶血素建议4度保存，溶血时间10分钟为宜，如果未裂解干净，建议多次裂解。溶血时间过长，如果是未加多聚甲醛，可能会导致抗原表达率降低或细胞分群不清。