求教一下凋亡试剂盒里的binding buffer 可以用PBS代替吗

shankelj1991

之前用的BD的凋亡试剂盒，里面带的有10×的binding buffer，现在快用完了，想问下这个能用PBS代替吗？不知道对结果会不会有影响啊。。或者可以一次少加点binding buffer 吗？说明书上染色完之后还要再加400ul，可以少加点或者不加吗？

小憨

不行的，因为Annexin V与外翻的磷酯酰丝氨酸特异性结合依赖于较高的钙离子浓度的，它的binding buffer就是提供高钙离子浓度的buffer。其实可以自己配置的，配方我查到一个BD公司的：
Binding Buffer is a 10X concentrate composed of a 0.2 µm sterile filtered 0.1M Hepes (pH 7.4), 1.4M NaCl, and 25 mM CaCl2 solution.4°保存，用前用去离子水稀释为1×即可。

stef1981

不能用PBS，染色效果差。用国产的buffer，一样的效果，还便宜

niwanmao

可以少加，但不能不加。buffer和PBS成份不同。

macxuao

这个结合缓冲液是个钙离子溶液，用PBS的话可能Annexin V基本上是染不上的，之前试过的，楼上提供的配方不错，可以自己配。