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[干细胞相关] 小鼠HSC细胞分析疑问

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发表于 2016-4-3 14:45:53 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星已解决
各位老师,你好,有个科研相关的问题想请教大家:

A single cell suspension of PB-MNCs was stained for
lineage markers (CD45R/B220, TER-119, TCR β, TCR
γδ, Gr-1 and CD11b) with antibodies conjugated to
fluorescein isothiocyanate (FITC), for CD45 with APCconjugated
antibody, and for Sca-1 with PE-conjugated
antibody (all from BD Biosciences Pharmingen, San
Diego, USA). Next, cells were incubated for 30 min
on ice, washed and fixed in 1% formaldehyde. After
a final washing step, the cells were analyzed by
fluorescence-activated cell sorting (FACS Aria II, BD
Biosciences, USA). At least 105 events were acquired and
analyzed using Cell Quest software (BD Biosciences).
The cell populations of Sca-1+CD45−Lin− cells and
Sca-1+CD45+Lin− (enriched in HSCs) were analyzed as
shown in Figure 2 (panel A and B), and expressed as
percentages of total events.

在文献看到这样的操作,我想做相同的实验。现在已按上面买了对应的抗体,现在问题是我的panel设计是lineage markers 的六种抗体先混合好再染色,还是分别染六管不同的lineage markers?



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你买的lineage不是直接混好吗?如果不是混好的就直接混好再用吧,不过每个抗体用前最好先滴定一下,按滴定结果按比例加入是不是会更好呢
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2016-4-3 14:45:54 | 显示全部楼层
你买的lineage不是直接混好吗?如果不是混好的就直接混好再用吧,不过每个抗体用前最好先滴定一下,按滴定结果按比例加入是不是会更好呢
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2016-4-3 22:50:05 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2016-4-3 19:13
你买的lineage不是直接混好吗?如果不是混好的就直接混好再用吧,不过每个抗体用前最好先滴定一下,按滴定 ...

我买的是单抗。。。我也赞同你的说法。我理解也是混合标记,但我看到有前人做一样的实验是分六管Lin染,这样子也能分析么?好像要求全阴细胞群对吧?那就一定要混合染色喽?
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发表于 2016-4-3 23:54:47 | 显示全部楼层
sharem 发表于 2016-4-3 22:50
我买的是单抗。。。我也赞同你的说法。我理解也是混合标记,但我看到有前人做一样的实验是分六管Lin染, ...

分成多管其它抗体就重复了,就浪费抗体了呀。
做系列特异性区分的,你只要把系列特异性抗体订同一个通道的,混在一起即可,不用分开。
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 楼主| 发表于 2016-4-4 23:08:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-4-3 23:54
分成多管其它抗体就重复了,就浪费抗体了呀。
做系列特异性区分的,你只要把系列特异性抗体订同一个通道 ...

我已全订了FITC的了,打算混合用,但有看到之前有人系列标记不混合一个一个分开测,我很奇怪那样能分析么?
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发表于 2016-4-5 08:03:34 | 显示全部楼层
sharem 发表于 2016-4-4 23:08
我已全订了FITC的了,打算混合用,但有看到之前有人系列标记不混合一个一个分开测,我很奇怪那样能分析么 ...

对啊,我觉得也是要混合才行的啊。
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发表于 2016-4-5 11:03:05 | 显示全部楼层
sharem 发表于 2016-4-4 23:08
我已全订了FITC的了,打算混合用,但有看到之前有人系列标记不混合一个一个分开测,我很奇怪那样能分析么 ...

看那类细胞是不是分群明显,如果在其它标记上能够区分开,那么每管都重复用这个能分群的标记,确定这群细胞系列特异性标记都阴性也是可以的,只是这样重复用的分群标记就比较浪费。
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 楼主| 发表于 2016-4-6 15:05:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-4-5 11:03
看那类细胞是不是分群明显,如果在其它标记上能够区分开,那么每管都重复用这个能分群的标记,确定这群细 ...

已确定混合使用啦,看这两天实验情况罗,还有小鼠是先溶血再染色好还是先染色再溶血好?
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 楼主| 发表于 2016-4-6 21:32:08 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-4-5 11:03
看那类细胞是不是分群明显,如果在其它标记上能够区分开,那么每管都重复用这个能分群的标记,确定这群细 ...

文章要求

文章要求

我做的结果

我做的结果


上图是这个实验文章的要求,下图是我刚做的结果,请问倪老师这个条件调的对么?没做过小鼠的,我做的图上有没看出不对的地方?
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发表于 2016-4-7 21:09:34 | 显示全部楼层
sharem 发表于 2016-4-6 21:32
上图是这个实验文章的要求,下图是我刚做的结果,请问倪老师这个条件调的对么?没做过小鼠的,我做的 ...

貌似可以。你用了哪几个LIN 标记?
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