四色荧光如何调荧光补偿

aya9988

我要做一个四色荧光的流式检测，检测CD4的含量和CD4与CD8的比值。用到的抗体是四色抗体（CD45-FITC;CD3-PC5;CD4-RD1;CD8-ECD）。现在我要做四个通道的荧光补偿，我应该如何设计方案及实验呢？越详细越好。急需，现场等答案。

niwanmao

做4根单标管：
1、CD45 FITC ，调节PE和FITC之间的补偿。
2、CD4 PE，调节PE和FITC、PE和ECD、PE和PC5之间的补偿。
3、CD8 ECD，调节PE和ECD、ECD和PC5之间的补偿。
4、CD3 PC5，调节PC5和ECD、PC5和PE之间的补偿。

aya9988

倪老师，我CD4对应的荧光蛋白是RD1，不是PE

aya9988

倪老师，我CD4对应的荧光蛋白是RD1，不是PE

aya9988

倪老师，我CD4对应的荧光蛋白是RD1，不是PE

niwanmao

aya9988 发表于 2016-4-9 19:15
倪老师，我CD4对应的荧光蛋白是RD1，不是PE

RD1＝PE

aya9988

niwanmao 发表于 2016-4-10 10:01
RD1＝PE

刚好查资料看到了，正好要来说明一下，结果已经看到倪老师您的回复了，真是辛苦您 了！

aya9988

niwanmao 发表于 2016-4-9 18:55
做4根单标管：
1、CD45 FITC ，调节PE和FITC之间的补偿。
2、CD4 PE，调节PE和FITC、PE和ECD、PE和PC5之间 ...

倪老师，做4根单管时用到的样品是质控血吗？

aya9988

niwanmao 发表于 2016-4-9 18:55
做4根单标管：
1、CD45 FITC ，调节PE和FITC之间的补偿。
2、CD4 PE，调节PE和FITC、PE和ECD、PE和PC5之间 ...

倪老师，针对您说的“做4根单标管”，我这样理解对不对：
1、FITC与PE之间的光有交叉；
2、PE与FITC,ECD,PC5之间的光有交叉；
3、ECD与PE,PC5之间的光有交叉；
4、PC5与ECE,PE之间的光有交叉。

niwanmao

aya9988 发表于 2016-4-10 15:49
倪老师，针对您说的“做4根单标管”，我这样理解对不对：
1、FITC与PE之间的光有交叉；
2、PE与FITC,ECD, ...

是的。
你标本中这些标记应该都有阳性和阴性部分，所以直接用标本就行了。