关于流式细胞仪激光和通道的选择

实验猿

我按照文献上的描述选择了两种荧光染料Rhodamine110(Ex＝496nm,Em＝525nm),Sulforhodamine101(Ex＝586nm,Em＝605nm)分别选择了Fl1和FL3通道，用488nm的激光激发，Rhodamine110有很强的荧光信号，但是FL3通道几乎没有荧光信号（即使我用的sulforhodamine101浓度很高，有0.5mM）,我看文献上也是用488nm激光激发的，也是分别选择FL1和FL3通道，信号都很强。我用的流式细胞仪FACSCalibur，文献上用的是FACSCanto TM II

niwanmao

由于Sulforhodamine101的激发波长586nm，所以586nm是正道，488nm尽管别人能够激发，有可能跟检测的PMT比较敏感吧，Calibur还是偏旧了点。
那篇文献能传上来看看吗？

实验猿

niwanmao 发表于 2016-4-10 17:35
由于Sulforhodamine101的激发波长586nm，所以586nm是正道，488nm尽管别人能够激发，有可能跟检测的PMT比较 ...

文献有点大，显示不能上传，我把链接发上来http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2014/tb/c4tb00942h
http://pubs.rsc.org/en/content/a ... #!divRelatedContent

实验猿

niwanmao 发表于 2016-4-10 17:35
由于Sulforhodamine101的激发波长586nm，所以586nm是正道，488nm尽管别人能够激发，有可能跟检测的PMT比较 ...

我把F L1 的PMT调到了480，F L3的PMT调到了750

niwanmao

实验猿 发表于 2016-4-10 18:29
我把F L1 的PMT调到了480，F L3的PMT调到了750

那篇pdf我没有细看，粗粗扫了一下，貌似没看到用流式检测嘛

实验猿

niwanmao 发表于 2016-04-10 21:57:05

                               
登录/注册后可看大图

那篇pdf我没有细看，粗粗扫了一下，貌似没看到用流式检测嘛

有的，在文献最后一段，而且在supporting information里面有一幅图。我想问的是FACSCailbur与FACSCanto的滤光片在FL3通道上有什么区别吗？为什么文章里的流式细胞仪可以488nm的激光激发，同样的染料用FACSCailbur就不能激发呢？

实验猿

niwanmao 发表于 2016-4-10 21:57
那篇pdf我没有细看，粗粗扫了一下，貌似没看到用流式检测嘛

为了老师能更方便了解我要表达的意思，我把两篇文献中的几段话截图发上来

niwanmao

实验猿 发表于 2016-4-11 08:46
为了老师能更方便了解我要表达的意思，我把两篇文献中的几段话截图发上来 ...

如果文章可靠，应该是都可以检测的。
两种仪器的光路结构见下：
CantoII：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3715-1-1.html
Calibur：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3708-1-1.html


所以，我觉得你再重复一下，或者将你的数据也传上来看看。

实验猿

昨天我找了一个专门负责做流式的老师又帮我做了一次，他把PMT调到820，信号比之前高了一些，我问了BD公司的工程师，他说其实Calibur的FL3通道实际是大于670nm,因为我这个染料最大发射波长在605nm，所以用Calibur的FL2通道也能检测到信号。

niwanmao

实验猿 发表于 2016-4-12 10:28
昨天我找了一个专门负责做流式的老师又帮我做了一次，他把PMT调到820，信号比之前高了一些，我问了BD公司的 ...

几个通道的信号都可以同时获取的嘛，都获取下来看看哪个通道好就用哪个通道。