关于流式细胞术CV值的讨论

刀刀明

做流式细胞术cv值控制在多少合适，我最近做treg发现cv值达到40-50%，哪位前辈能就cv的具体含、其影响因素及如何控制做一下解释、交流一下宝贵经验。谢谢了

niwanmao

对于流式结果分布的评价指标，目前主要有两种，SD和CV。

1、SD（标准差，Standard Deviation）
SD的定义就是（每个点与平均值之间的距离）的几何平均值，用数学公式表示如下：


这里的Σ符号就代表总和，x代表细胞群中的每个值，m代表平均值，n代表细胞群的细胞数量。

但是流式实验中，很难用SD对比不同次的实验结果，因为可能你不同的实验是在不同条件或不同机器上做的，荧光值发生了变化就容易导致此值发生较大改变。
所以，可以考虑用另一个指标CV。

2、CV（变异系数，Coefficient of Variation）
变异系数的定义是：
  (SD/m) × 100
所以，CV是用百分率表示的，没有单位，而且不同次的实验，不同机器的结果均可以比较。举个例子，一次实验结果的平均值是100，细胞群分布范围是90～110，另一次实验结果平均值是1000，分布范围是900～1100，两者的SD结果不同，但CV值相同。

CV值主要用在哪些地方呢？
1、质量控制
在仪器的质量控制时，经常需要用标准微球对仪器的各个荧光通道进行CV值的检测，以保证CV值最小。


2、细胞周期分析
为了最好的区分G1和S期，就需要使G1的CV值尽可能小，如下图，很明显看出左侧图的CV值小，G1峰和S期的区分就更好。



3、细胞增殖
当我们用染料稀释法检测细胞增殖时，就需要尽量使父峰和各代子峰的CV值均能达到尽可能小，以便清晰地区分出每一个峰。


上面理解了CV值的含义，现在回到@刀刀明 提出的问题，CV值在上面几个应用中，是有要求的，质量控制方面，每家仪器厂家都会有他们相应的对每个荧光通道的CV要求，所以只要问一下工程师或者参考操作手册即可，而细胞周期分析，Modfit软件我记得对CV值的要求是8％，不知道有没有记错，对于细胞增殖倒是没有明确要求，但当然也是越小越好。


如果你是测Treg，那么就把CV值的要求放一边吧，因为Treg的foxP3、CD25分布都很宽，这是正常的情况，不是仪器状态不好或标准状态不好。

刀刀明

niwanmao 发表于 2016-4-21 20:46
对于流式结果分布的评价指标，目前主要有两种，SD和CV。

1、SD（标准差，Standard Deviation）

首先谢谢倪老师的详尽解答和示例。提出问题后，对于CV值我也仔细想了一下，确实对于细胞周期分析而言CV值非常重要，通俗一点理论上周期的结果应该很固定，只有G0/G1、S、G2/M峰，或有凋亡峰。过大的CV值必定是实验过程不可靠的有效衡量指标。而TREG这样的检测确是本质上不同于细胞周期的一种数据分布和呈现形式，这时用CV评价分峰明显但是数据本质就相对分散分布就显得不恰当。说到底是一种数据本质上的区别。
  受益匪浅。谢谢