『一招鲜』区分凋亡和自噬

niwanmao

提示：这种方法不一定是最好的，但肯定有效并且有说服力。

凋亡和自噬都是细胞程序化死亡的一种方式，以前认为检测caspase-3活化可以提示凋亡，但是caspase-3活化也可出现在其它过程中，无法有效区分凋亡和自噬。其实，结合膜渗透性的改变、细胞膜表面PS的反转、线粒体膜电位降低这三个指标，可以比较可靠地区分出凋亡和自噬。
这三个指标当然可以分别用PI、Annexin V、JC-1等染料依次检测，但实际上我们可以借助DiOC6和PI两个染料，一次性检测膜渗透性和线粒体膜电位改变，并且进行功能学验证。

例如，我要做STS（staurosporine，星孢菌素）对人骨肉瘤细胞U2OS的作用，想了解这种药物对U2OS的作用究竟是通过诱导凋亡还是自噬，那么就可以简单做以下4组样本（如下图）：
第一组，siUNR（空白对照的siRNA，作为第二组的空白对照）分别作用于空白细胞和加STS的细胞，用空白细胞设门，分析加STS细胞中活细胞的线粒体膜电位降低（PI－DiOC6 low的比例）
第二组，siATG5（针对ATG5的siRNA），分别作用于空白细胞和加STS细胞，因为siATG5可抑制自噬，所以通过观察PI－DiOC6 low的比例判断自噬在其中起到的作用如何。
第三组，单纯的空白和加STS药物细胞，同样检测PI－DiOC6 low的比例。
第四组，加Z-VAD-FMK，可抑制凋亡，同时作用于空白细胞和加STS药物的细胞，检测PI－DiOC6 low的比例变化，以判断凋亡在STS诱导细胞死亡中的作用如何。

从上图，很容易看的出来，用siATG5抑制自噬后，PI－DiOC6 low的比例几乎不变，而用Z-VAD-FMK抑制凋亡后，PI－DiOC6 low的比例明显降低，说明STS诱导U2OS细胞的作用机制是凋亡。


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