初次做流式关于抗体和酶有些问题想请教

梦巴黎

1.测ST2在胎盘组织的表达情况,试剂盒里的抗体有：APC/CY7 anti-human CD3,APC/CY7 anti-human CD4,PE anti-human CD4,PE/CY7 anti-human CD4,PerCP anti-human CD4,Alexa Fluor 488 anti-human CD4,Alexa Fluor 647 anti-human CD4,APC anti-human CD16,PE/CY7 anti-human CD25,PE anti-human CD56,PE anti-human FOXP3,APC anti-human CD127，ST2抗体，我要做六染，是不是准备6个管，每个管里先加入ST2抗体，孵育20分钟，离心后每个管里分别加CD4抗体，孵育，离心再依次加入其它抗体。

2.我购买的以test为计量单位，规格是100tests，500 5ul/test,意思是不是每次加入抗体量是5ul.

3.每加入一种抗体都要孵育，离心吗？

4.购买的Sigma公司的胶原酶1跟Dnase酶，这两种酶如何配制？

niwanmao

1、为什么这么多个CD4？

2、是的，默认5ul，但如果有可能，最好滴定一下找最佳剂量 。

3、需要。

4、用PBS配制，分几个小管保存在－20度。

梦巴黎

niwanmao 发表于 2016-5-8 20:12
1、为什么这么多个CD4？

2、是的，默认5ul，但如果有可能，最好滴定一下找最佳剂量 。

1 这是老师买的试剂盒，他说要做六染，我也不知道为什么这么多CD4，我的理解是：准备6个管，每个管里先加入ST2抗体，孵育20分钟，离心后每个管里分别加6种CD4抗体，孵育，离心再依次加入其它抗体。老师您经验多您说我这样理解对吗
2 胶原酶1跟Dnase酶，我需要配成酶混合液，0.2g的胶原酶+0.001g的Dnase酶，加入到100ml的PBS，这样配行吗，如果这样配0.001g的Dnase酶怎么称量，
3  配酶混合液的时候是不是还要用0.22微米的过滤器过滤

niwanmao

梦巴黎 发表于 2016-5-8 20:50
1 这是老师买的试剂盒，他说要做六染，我也不知道为什么这么多CD4，我的理解是：准备6个管，每个管里先加 ...

你能否把试剂盒名称发上来，我搜搜看，

bernie1023

猜测是用来调补偿的？好像也不至于

梦巴黎

niwanmao 发表于 2016-5-9 11:51
你能否把试剂盒名称发上来，我搜搜看，

老师我买的Sigma公司的胶原酶1（C0130 1g）和Dnase酶（DN25 100mg）， 胶原酶1跟Dnase酶，我需要配成酶混合液，该怎么配

西伯男

不懂为什么这么多CD4！

梦巴黎

西伯男 发表于 2016-5-17 16:00
不懂为什么这么多CD4！

我问我的老师他说用来补偿