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2012年,我们编译了一篇Blood的《间期细胞染色体FLOW-FISH》(链接:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1845-1-1.html),讲的是利用间期细胞来做7号染色体单体的FLOW-FISH,改变了常规染色体只能做分裂相的缺点。经过了4年,大家一直在想,能否结合免疫标记(尤其是表面标记),可以确定特定细胞内的遗传学异常呢?
今年的5月份的Cytometry A杂志上刊登了一篇《Development of a Robust Immuno-S-FISH Protocol Using Imaging Flow Cytometry》,虽然用的是图像流式细胞仪,但是,其处理方法还是给了我们一定的启示。
文中作者对标记条件,包括抗体的荧光素、淬灭条件等均进行了摸索。其中抗体的荧光素方面,他们发现Qdot系列和PE-cy5、PE-cy7在变性和杂交后容易荧光淬灭,所以建议避免使用。
优化的步骤如下:
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