Treg细胞检测前为什么不需要PMA刺激？

guoguoxinguang

          大家好，本人利用流式细胞技术分析了人Treg及Th17细胞的比例，Th17细胞检测前PMA、ionomycin、monensin 进行刺激，参考相关文献及试剂盒操作步骤HumanFoxP3 Buffer Set（560098）对Treg细胞检测前未进行刺激，文章投出去了，Reviewer提问“WhyPBMC were activated for TH17 and normal PBMC for Treg analysis”，请高手帮忙解答，十分感谢。

Victorrwang

刺激用的是pma 和 inomycin
monensin是做 intracelular protein trasport抑制剂。
Treg检测通常涉及到检测FOXP3，是transcription factor，而非cytokines，所以不需要刺激细胞

guoguoxinguang

Victorrwang 发表于 2016-5-14 11:01
刺激用的是pma 和 inomycin
monensin是做 intracelular protein trasport抑制剂。
Treg检测通常涉及到检测F ...

你好，非常感谢，Treg细胞的检测我分别的是anti-human CD4-FITC 及 anti-human Foxp3-PE 标记表面抗原及核内抗原，您的意思是Foxp3在Treg是持续表达的不需要刺激产生吗？

Victorrwang

guoguoxinguang 发表于 2016-5-14 15:43
你好，非常感谢，Treg细胞的检测我分别的是anti-human CD4-FITC 及 anti-human Foxp3-PE 标记表面抗原及 ...

一般情况下是这样的。延伸一下
与Th1相对应的TF是T-bet
Th2------GATA-3
Th17-----RoRgt
Treg----Foxp3
Tfh-----Bcl-6

niwanmao

正常情况下，Treg和Th17都不需要刺激，直接就能测。而你之所以用PMA和离子霉素刺激，我认为应该目的是为了验证T细胞功能。所以需要结合你的课题设计、文章目的进行说明。

guoguoxinguang

niwanmao 发表于 2016-5-15 21:17
正常情况下，Treg和Th17都不需要刺激，直接就能测。而你之所以用PMA和离子霉素刺激，我认为应该目的是为了 ...

您好，您能稍微详细一些吗？我的实验是检测同一疾病中Treg及Th17细胞的比值。你说的“验证T细胞功能”，一般指的是哪一方面。最近上班比较忙，现在才看到您的回复，你的指导非常重要，谢谢。

niwanmao

guoguoxinguang 发表于 2016-5-24 00:02
您好，您能稍微详细一些吗？我的实验是检测同一疾病中Treg及Th17细胞的比值。你说的“验证T细胞功能”， ...

你先将你的课题设计稍微讲一下。

htc728

niwanmao 发表于 2016-5-24 08:40
你先将你的课题设计稍微讲一下。

您好，我们实验室有人做Th17，听他说如果用流式检测IL-17A必须刺激并使用高尔基阻断剂，否则无法测出IL-17A的阳性峰，请问这是对的吗？

niwanmao

htc728 发表于 2016-6-6 16:13
您好，我们实验室有人做Th17，听他说如果用流式检测IL-17A必须刺激并使用高尔基阻断剂，否则无法测出IL-1 ...

刺激是为了检测出淋巴细胞功能，正常未受到刺激的情况下，正常人体内会有Th17，但非常低，所以很难测，而刺激后就容易分化出相应的群体，容易检测到。我是这么理解的：）