关于二抗同型对照抗体的选择

niwanmao

标题：关于二抗同型对照抗体的选择

倪老师：

  你好，我使用间接标记法测膜蛋白，为了排除非特异性结合，要设置同型对照，看了一些资料，目前关于间接标记法

的同型对照抗体设置有两种，第一种比较常见，与一抗同来源的正常血清+荧光二抗。第二种是直接使用荧光二抗。

这两种方法有什么区别呢？如果只使用荧光二抗不就是空白对照了吗？

回答者：niwanmao

正确的用法应该是与一抗相同亚型的Ig+荧光二抗。

2009年8月12日 0:54

Veblen

顺便问问老师，二抗的对照，也就是画门分析是否是：
去购买一抗的同型对照抗体(无荧光标记)，然后再加入二抗，作为阴性对照画门？
另，这样的同型对照抗体，一般western和流式是通用的吗？我怕给试剂厂商讲不明白。
谢谢老师。

niwanmao

Veblen 发表于 2024-12-10 00:39
顺便问问老师，二抗的对照，也就是画门分析是否是：
去购买一抗的同型对照抗体(无荧光标记)，然后再加入二 ...

虽然同型对照用于设门其实不建议（生物学阴性对照最佳），但如果确实找不到良好的生物学阴性对照，只能退而求其次用这个，可以按你说的设门

至于Western和流式是否通用，这个不一定，最好参考权威文献选择

Veblen

niwanmao 发表于 2024-12-10 07:54
虽然同型对照用于设门其实不建议（生物学阴性对照最佳），但如果确实找不到良好的生物学阴性对照，只能退 ...

谢谢老师，我的理解生物学阴性对照只有那些需要刺激才表达的抗原才能用作生物学阴性对照(比如细胞因子)？其他抗原无法设置阴性对照，是这样吗？

niwanmao

Veblen 发表于 2024-12-10 20:23
谢谢老师，我的理解生物学阴性对照只有那些需要刺激才表达的抗原才能用作生物学阴性对照(比如细胞因子)？ ...

不是，同一种标本类型，不表达抗原的细胞，就是生物学阴性对照

例如我要检测人白细胞的CD7，那么我用人的单核细胞作生物学阴性对照