流式测凋亡设门的问题

Y_MJ

请问各位前辈，流式测定细胞凋亡的图中，门怎么设置比较合理。谢谢。

Arcrain

你的结果要先做好补偿。
测凋亡设定门的界限位置要根据对照样本来，就是正常没凋亡的细胞，用完全相同的条件染色。这个很重要，因为Anexin-V标记PS会有很高的背景染色，让未凋亡细胞群显著右移。（PS在细胞膜外层也是有一点的）。
你这个是降低了电压，压低了未凋亡细胞群的信号。不妨把FITC电压适当调高点，可能会让早凋阴性和阳性细胞群区分得更开些，也有利于调节补偿值。

燕仔zoe

个人感觉FITC的补偿好像有点不足，另外PI的线要拉高点，不能按no stained作为划线依据。
这样划线会不会更好一些。

bernie1023

可以通过设立阳性对照来设门。比如我们公司的阳性质控液处理细胞，使细胞死亡，然后和活细胞混合，这样可以人为制造阳性细胞和阴性细胞，并用来调节补偿。根据阳性对照来设门比阴性对照更好。
另外可以用等高图来分群会更好些。

decade911

把细胞加热处死，然后和没死的混合，之后分别单染，就是所谓的fmo，然后根据单染来设门。

Y_MJ

燕仔zoe 发表于 2016-5-26 16:53
个人感觉FITC的补偿好像有点不足，另外PI的线要拉高点，不能按no stained作为划线依据。
这样划线会不会更 ...

@niwanmao审稿人问Q2细胞分成两部分的原因， 请问怎么回复才能比较容易被认可？

燕仔zoe

这个问题我也很好奇，因为在做检测的时候经常能碰到这种，双阳的那个区块，PI是上下两道的强阳性。
PI是DNA嵌合染料，不知道可能的因素会不会检测的细胞很多处于分裂期？
具体的原因我也不知道，坐等倪老师的权威解答~

niwanmao

Y_MJ 发表于 2016-5-27 14:50
@niwanmao审稿人问Q2细胞分成两部分的原因， 请问怎么回复才能比较容易被认可？ ...

是因为十字门位置错了呀，如果像@燕子zoe 那样设就不会有问题了

niwanmao

燕仔zoe 发表于 2016-5-27 16:32
这个问题我也很好奇，因为在做检测的时候经常能碰到这种，双阳的那个区块，PI是上下两道的强阳性。
PI是DNA ...

我目前倒还没碰到，一般都是补偿和设门的问题吧。

燕仔zoe

niwanmao 发表于 2016-5-27 23:01
是因为十字门位置错了呀，如果像@燕子zoe 那样设就不会有问题了

我不太清楚@Y_MJ 提到的是不是我图上圈出来的Q2的那两群。