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流式染色中,最难的是破膜,了解破膜剂的秘密,能够更好地进行胞内染色。
为什么要进行破膜?
很简单,就是希望研究细胞内部的蛋白分子,正常情况下,荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜,只能在细胞膜上打出足够大的孔,才能使抗体进入细胞内。
一般,破膜主要分为以下几步:
(1)用醛类(多聚甲醛、甲醛、戊二醛)或有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮)固定或稳定细胞膜。
醛类在固定的同时可以增加细胞渗透性,但还不足以使抗体进入。但如果用有机溶剂固定,那么后续的破膜就不需要了。
(2)用去污剂或溶剂破膜。
(3)将细胞与胞内抗体或标记物孵育。
我什么时候需要用去污剂?
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什么是去污剂?工作原理是什么?
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