平均荧光强度怎么扣除空白对照

vivi主子

我最近做氧化应激，遇到了问题，请大家帮帮我，如题
实验目的：研究悬浮细胞内活性氧
实验过程：对照组：细胞
               实验组：同一份细胞相同体积+荧光探针
结果：如图，上边图片为对照组，下边为实验组
         看了这里边帖子，我这种分群不明显，只有单峰的，宜用平均荧光强度表示
那么，1、如果用FL1-A+的平均荧光强度吗？但是这样的话，对照组和实验组没有什么差别，分别是4974，4273；对照组比实验组还高？
2、如果用整个FL1-A的平均荧光强度，差别明显，分别是319，840；符合实验，但是，实验组怎么扣除对照组即细胞本身的荧光强度呢？用实验组
平均荧光强度/对照组平均荧光强度，还是（实验组平均荧光强度-对照组平均荧光强度）/对照组平均荧光强度？
请大家帮帮忙！谢谢！

空白对照：不加荧光探针

实验组：加荧光探针

niwanmao

实验组和对照组各重复三次，测几十个标本。直接拿平均荧光强度进行统计学t检验，不要减不要除。

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-6-29 15:05
实验组和对照组各重复三次，测几十个标本。直接拿平均荧光强度进行统计学t检验，不要减不要除。 ...

谢谢老师！但是老师，我需要的是实验组也就是每份细胞加了探针之后的平均荧光强度。
老师，您教我的方法，意思是比较加了探针后，实验组和对照组有区别，对吧？

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-6-29 15:05
实验组和对照组各重复三次，测几十个标本。直接拿平均荧光强度进行统计学t检验，不要减不要除。 ...

老师，我是做一个食物对细胞活性氧影响，周期比较长，60天之后才能第二次检测，所以，我就想能不能测一个扣除细胞本身荧光的荧光强度？

niwanmao

vivi主子 发表于 2016-6-29 15:25
老师，我是做一个食物对细胞活性氧影响，周期比较长，60天之后才能第二次检测，所以，我就想能不能测一个 ...

扣除本底，是ELISA沿袭过来的思维，曾经看到有些流式文章确实也在减，但我个人觉得，流式上就直接比较两者的表达率或平均荧光强度即可，有没有差异本身统计学就比较的出来。你担心的是60天以后再测，细胞自发荧光改变或者仪器会有变异，这没关系，只要再做一个对照即可，直接0天实验组vs对照组，60天实验组vs对照组，你们想看到的结果应该是0天无差异，60天有差异吧？

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-6-29 15:45
扣除本底，是ELISA沿袭过来的思维，曾经看到有些流式文章确实也在减，但我个人觉得，流式上就直接比较两者 ...

噢~谢谢老师。那我这个实验岂不是不需要设计空白对照也就是不需要那个不加探针的组？另外是用整个FL1-A的平均荧光强度还是FL1-A+的平均荧光强度？
谢谢老师的解答
谢谢！

niwanmao

vivi主子 发表于 2016-6-29 15:53
噢~谢谢老师。那我这个实验岂不是不需要设计空白对照也就是不需要那个不加探针的组？另外是用整个FL1-A的 ...

我个人觉得不需要。

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-6-29 16:05
我个人觉得不需要。

好的，谢谢老师