Tfh细胞检测

wsgcc

弗氏佐剂免疫小鼠后，取脾淋巴细胞后进行滤泡辅助性T细胞检测，为什么会出现框中那一群细胞？Tfh细胞应为CD3/CD4/CXCR5/PD-1阳性。是死细胞呢，还是粘连的细胞？
感谢帮助！
另外问个非技术性的问题：标记好的细胞过地铁安检是否会有影响？

niwanmao

这些都是死细胞，会造成明显的非特异性染色。
标记好的细胞过地铁一般不会影响，因为那是X光。

wsgcc

因为最近刚开始做流式，那么死细胞怎么可以避免呢？之前测过另外一个佐剂免疫小鼠的脾淋巴细胞，情况似乎要好一些。还是只能加上染料区分死细胞呢？
地铁安检的X光不会对荧光产生影响，或者杀死细胞吗？
多谢您的回答。

niwanmao

wsgcc 发表于 2016-7-4 21:46
因为最近刚开始做流式，那么死细胞怎么可以避免呢？之前测过另外一个佐剂免疫小鼠的脾淋巴细胞，情况似乎要 ...

目前商业化死活染料挺多的，有Life公司的live/dead，有Biolegend的Ghost等等。
如果怕花钱，就用低浓度PI染料，上机前染1分钟。

Victorrwang

光打弗氏佐剂好像不会诱导Tfh吧？就算打的是CFA主要诱导的好像也是extra－follicular reaction。
我记得当时得加其它抗原，或者直接打经典的NP-KLH

wsgcc

Victorrwang 发表于 2016-7-5 16:36
光打弗氏佐剂好像不会诱导Tfh吧？就算打的是CFA主要诱导的好像也是extra－follicular reaction。
我记得当 ...

奥，我还加了我自己的疫苗蛋白，弗氏+PBS是对照组。NP-KLH是什么？
感谢您的回答

niwanmao

wsgcc 发表于 2016-7-6 08:08
奥，我还加了我自己的疫苗蛋白，弗氏+PBS是对照组。NP-KLH是什么？
感谢您的回答 ...

NP-KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin), NP hapten conjugated to KLH

wsgcc

niwanmao 发表于 2016-7-6 09:24
NP-KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin), NP hapten conjugated to KLH

3幅图是分两次不同的实验，前2幅图用的是 BD的破膜液，最后那个用的是BD的Transcription Factor Buffer Set,为什么截然不同？第二种buffer是不是不合适？

niwanmao

wsgcc 发表于 2016-7-6 21:23
3幅图是分两次不同的实验，前2幅图用的是 BD的破膜液，最后那个用的是BD的Transcription Factor Buffer Se ...

IL-4阳性都挺少的，很难确定是否破膜有效

wsgcc

今天看到有的protocol中写流式染色液中加入2%的FBS,另外在重悬细胞吸打时为避免损伤细胞将枪头剪短。这样是否可以减少细胞的损伤呢？
感谢版主的回答。