TUNEL（FITC单染）分析结果求助

vivi主子

用的TUNEL试剂盒，这是FITC-dUTP单染的结果，我想请问是不是细胞都被处理坏了？是什么原因呢？
第一个图：是用流式仪自带的“analyze”做的，从左到右分别是阴性对照、实验、阳性对照，这么划门对吗（阴性组：1.1%、实验组：15%、阳性组：83%）？实验组的那个门怎么没有恰好在第一个峰和第二个峰交界处，这样可以吗？阴性对照组和实验组的第一个峰怎么没有重合？
不胜感激！谢谢！

niwanmao

从FSC和SSC散点图看，几乎都成碎片了，圈中的这15％估计状态也不能，未必能反映真实结果呢。

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-7-6 16:07
从FSC和SSC散点图看，几乎都成碎片了，圈中的这15％估计状态也不能，未必能反映真实结果呢。 ...

谢谢老师，老师，我这个没有染PI，一定要染PI吗？染PI后是要加一个以PI为横坐标，count
为纵坐标的图吗？谢谢！

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-7-6 16:07
从FSC和SSC散点图看，几乎都成碎片了，圈中的这15％估计状态也不能，未必能反映真实结果呢。 ...

老师，我看到了您之前发的图片，但是我不知道，您那个是染了PI吗？横坐标、纵坐标分别是什么也不懂？
谢谢老师！

niwanmao

vivi主子 发表于 2016-7-6 16:19
老师，我看到了您之前发的图片，但是我不知道，您那个是染了PI吗？横坐标、纵坐标分别是什么也不懂？
谢 ...

加了PI可以了解哪个周期发生了DNA断裂。不加也是可以的。
你如果真要分析，就以细胞群分布设门，不用管对照的位置，因为细胞状态不好的时候，你的对照就失去了参照意义了。

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-7-6 18:09
加了PI可以了解哪个周期发生了DNA断裂。不加也是可以的。
你如果真要分析，就以细胞群分布设门，不用管对 ...

好的，谢谢老师！老师但是我看到有篇文献是这样说的，我不明白是做一个点图还是直方图？横坐标、纵坐标分别是什么？谢谢！
Gating was performed on red(P1 stain) versus log green (FITC-avidin) cytograms to separate cells from debris in the creation of the green fluorescence frequency histograms. In some instances, the cells and debris were indistinguishable at the higher channels.

niwanmao

vivi主子 发表于 2016-7-7 10:02
好的，谢谢老师！老师但是我看到有篇文献是这样说的，我不明白是做一个点图还是直方图？横坐标、纵坐标分 ...

这篇文献里面的双染，FITC-avidin和PI双染。

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-7-7 10:54
这篇文献里面的双染，FITC-avidin和PI双染。

谢谢老师。老师我看了其他文献，有的也是这么说，他不是指的圈出PI染上的部分，然后做FITC的直方图吗？

niwanmao

vivi主子 发表于 2016-7-11 09:35
谢谢老师。老师我看了其他文献，有的也是这么说，他不是指的圈出PI染上的部分，然后做FITC的直方图吗？ ...

用PI可以测出DNA含量，从而可区分各个细胞周期，并将细胞与碎片分开。这样有助于分析真正的细胞或者分周期分析。分析步骤可你需要，不是圈PI染上的部分，而是按照细胞周期分析那样圈出细胞部分，再分析FITC

vivi主子

niwanmao 发表于 2016-7-11 19:01
用PI可以测出DNA含量，从而可区分各个细胞周期，并将细胞与碎片分开。这样有助于分析真正的细胞或者分周 ...

谢谢老师！老师讲的真详细，谢谢老师！