染抗体之后细胞贴壁严重，可以用超声吗

vivic5015

细胞染完抗体后，上流式检测，由于细胞不多，所以每个样品花了好几分钟才测完，有些最后才检测的样品细胞很少，发现是贴在流式管上了，斡旋和吹打都不能把细胞弄下来。后来发现超声可以。请问超声会影响样品检测吗？谢谢！

niwanmao

你是如何验证的？一般得看超声的强度吧？因为以前蛋白电泳之前，就是用高频超声粉碎细胞的。

vivic5015

我也是担心超声会对细胞不好，不知道该怎么验证。有没有什么方法可以防止细胞贴壁？我用2mMEDTA重悬细胞，还是贴壁了。

niwanmao

vivic5015 发表于 2016-7-13 21:46
我也是担心超声会对细胞不好，不知道该怎么验证。有没有什么方法可以防止细胞贴壁？我用2mMEDTA重悬细胞， ...

那你所说的“斡旋和吹打都不能把细胞弄下来。后来发现超声可以。”这句话是什么意思？应该是发现超声使团块掉下来吧，那可能细胞已经被粉碎了。
如果想不影响细胞状态，我觉得应该跟超声频率有关，因为Life的Attune系列就是用超声使细胞既快速又整齐地通过激光激发。

vivic5015

niwanmao 发表于 2016-7-13 21:55
那你所说的“斡旋和吹打都不能把细胞弄下来。后来发现超声可以。”这句话是什么意思？应该是发现超声使团 ...

我觉得不是团块。样品刚准备好时，对着光晃动，能看见很多细胞在液体里飘动，这时候上流式也是能收到很多细胞的。但随着放置时间延长，流式收到的细胞就越来越少，对光看能看见管壁上贴了很多细胞，晃动也下不来，取少量液体在镜下看，也基本没有细胞。后来超声，就又能在液体里看见飘动的细胞，但放置一会细胞又都贴壁了。

niwanmao

vivic5015 发表于 2016-7-13 23:05
我觉得不是团块。样品刚准备好时，对着光晃动，能看见很多细胞在液体里飘动，这时候上流式也是能收到很多 ...

准确地说，应该是颗粒状物质，因为你没上流式验证过，不能说明是细胞被你超声下来了。

vivic5015

niwanmao 发表于 2016-7-14 09:17
准确地说，应该是颗粒状物质，因为你没上流式验证过，不能说明是细胞被你超声下来了。 ...

超声之后有上流式，收到的细胞确实多了。但我不敢确定会不会对荧光值有影响。

niwanmao

vivic5015 发表于 2016-7-14 13:36
超声之后有上流式，收到的细胞确实多了。但我不敢确定会不会对荧光值有影响。 ...

可以作为一个小课题研究，或许可以写篇文章，真的，把超声的频率、时间都摸索清楚，就是一篇好文章。

yangguo1018

什么细胞贴壁这么严重 是不是与流式管有关系呀？

vivic5015

yangguo1018 发表于 2016-7-14 16:23
什么细胞贴壁这么严重 是不是与流式管有关系呀？

做过人肺上皮细胞和人嗜酸性粒细胞，都贴壁，肺上皮细胞更严重些。我也怀疑是流式管的原因。