请教各位前辈关于画门的问题

crystallee89100 · 发表于 2016-7-14 22:02:21

请教各位前辈，如图是我用淋巴细胞分离液获得的小鼠淋巴细胞，经PMA和离子霉素刺激24h后做流式获得的数据。我想请问如图中灰色箭头所指，是否是CD8+CD4-的细胞呢？如果是，为什么是两团细胞呢？请各位前辈指导。

niwanmao · 发表于 2016-7-15 10:43:37

是的，可以参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5199-1-1.html

有时候可能也未必是两群，而是显示上的一个误差。

crystallee89100 · 发表于 2016-7-15 11:21:40

了解啦，太谢谢倪老师了~

crystallee89100 · 发表于 2016-7-15 11:25:51

另外再请教一下倪老师，那我这群细胞中是不是就没有DP的细胞?

niwanmao · 发表于 2016-7-15 21:15:46

crystallee89100 发表于 2016-7-15 11:25
另外再请教一下倪老师，那我这群细胞中是不是就没有DP的细胞?

你这里的CD4和CD8分得不是很好，至少看不出明显成群的，即使圈出双阳性区域也是很稀少。

crystallee89100 · 发表于 2016-7-31 11:29:34

niwanmao 发表于 2016-7-15 21:15
你这里的CD4和CD8分得不是很好，至少看不出明显成群的，即使圈出双阳性区域也是很稀少。 ...

谢谢倪老师~我只要求CD3+CD8+不要求CD3+CD4+CD8+，这样的结果还是可以用吧？倪老师，我这里CD4和CD8分的不好的原因是什么呢？怎么解决呀？

niwanmao · 发表于 2016-7-31 12:06:30

crystallee89100 发表于 2016-7-31 11:29
谢谢倪老师~我只要求CD3+CD8+不要求CD3+CD4+CD8+，这样的结果还是可以用吧？倪老师，我这里CD4和CD8分的 ...

CD3＋CD8＋如下图设门即可。你的数据分群可以的啊，你的意思可能是没有其它人的那样分得开吧？这可能跟抗体滴度有关，或者你这管是破膜染色？
屏幕快照 2016-07-31 下午12.04.21.jpg

crystallee89100 · 发表于 2016-7-31 16:41:16

嗯，对，是破膜了的。谢谢倪老师~

niwanmao · 发表于 2016-7-31 22:09:12

crystallee89100 发表于 2016-7-31 16:41
嗯，对，是破膜了的。谢谢倪老师~

目前市场上所有的破膜剂几乎都会影响到破膜以后的细胞FSC、SSC以及一些自发荧光水平，所以导致有些抗体分群不如表面染色好，这正是我现在研发新式破膜剂的原因，目前已初步有进展，在不久的时间就会和大家见面。

zhenlai_zhu · 发表于 2016-7-31 23:40:22

确实破膜之后原来染的表面Marker的荧光都会有所下降，期待新型的破膜剂

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