请各位前辈帮忙分析流式结果

crystallee89100

我在分析流式结果的时候发现一些很基础的问题，因为是新手，只好厚着脸皮请教流式中文网的各位前辈。问题也可能问的不是很清楚，请前辈们指出。我是同一批细胞用PMA和离子霉素刺激24h后做的几管不同的染色，为什么跑出的流式结果淋巴细胞群图1和图2会出现两种不同的分群呢？图1和图2中小一些的那一群分别是什么？
后面的两张图（CD49bNK1.1 a和CD49bNK1.1 b），a图是只做了表染的，b图先表染然后固定破膜染胞内，发现只表染的那组（a）NK1.1有阳性细胞，而固定破膜的那组（b）则NK1.1没有阳性，重复了有三次这样的情况，都是固定破膜了之后NK1.1就没有阳性的了。请问前辈们，这样的情况怎么解决呢？是更换固定破膜的试剂盒还是怎样？我是先圈出CD3阴性的细胞，然后用CD49b和NK1.1双阳性的细胞来圈小鼠NK细胞。是否CD3-CD49b+就可以直接代表NK细胞，不需要NK1.1阳性？

niwanmao

确实是这样，很多情况下，固定破膜会影响一些抗原分子的荧光分群，可能两大主要原因：
1、阴性细胞非特异性荧光强度增强，导致阴性阳性分群不清。
2、固定后影响某些分子的表位结构。
3、影响FSC和SSC，导致荧光分子与FSC或SSC散点图上分群不清。

正因为这个现象特别普遍，所以我现在在寻找一种比较温和而又不影响表面分子表达的固定破膜成份，初步有了眉目。

至于对你目前的数据，我的建议是将NK1.1与其它荧光通道都搭配一下看看，看在哪个组合散点图上分群会更好一些，应该还是可以找得到分群清楚的散点图。