请问各位老师，这个图该怎么分析

陌上桑

我做的细胞是培养的干细胞，用不加任何抗体的空白细胞、同型对照组、实验组进行流式分析，得出的结果如图所示：其中红色为空白组，绿色为同型对照组，蓝色为实验组。
从图中可以看出，实验组的细胞荧光强度明显高于同型对照组，标记的是CD45抗体，这个结果能否说明实验组细胞表达CD45呢？如果不表达CD45，为什么实验组的细胞荧光强度会那么高？

niwanmao

陌上桑 发表于 2016-8-3 08:54
不同种类的细胞，细胞表面的抗原数量也不一样了，所以拿来做对照的话，只能确定阳性的强弱，这是我的理解 ...

拿粒细胞或淋巴细胞对比，就是希望通过表面抗原数量的差异作为参照来对比。至于上面图中的偏移，我觉得只有两种可能：
1、同型对照反映不了真实本底，偏弱，那么CD45这个峰才是真实的本底，纯阴性。
2、同型对照能够反映真实本底，那么CD45呈微弱表达，这个可能性也不能完全排除。

我的建议：
如果真的想确定CD45分子数量，可以考虑采用定量流式细胞术确定CD45的绝对数量：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5284-1-1.html

zal86

实验组的荧光亮度不高，就说明CD45表达不高了，所以很正常

陌上桑

zal86 发表于 2016-8-2 16:48
实验组的荧光亮度不高，就说明CD45表达不高了，所以很正常

按理说干细胞是不表达CD45的，所以出现这种情况我感到很迷惑。通过检测干细胞其他的标志，能确定细胞确实是干细胞

niwanmao

陌上桑 发表于 2016-8-2 17:02
按理说干细胞是不表达CD45的，所以出现这种情况我感到很迷惑。通过检测干细胞其他的标志，能确定细胞确实 ...

培养后可能由于细胞形状或里面颗粒度、活性等影响，会导致荧光发生一定程度的偏移，这都是可能的。总体感觉应该还是阴性的。

陌上桑

niwanmao 发表于 2016-8-2 18:06
培养后可能由于细胞形状或里面颗粒度、活性等影响，会导致荧光发生一定程度的偏移，这都是可能的。总体感 ...

如果是这样的话，空白组和同型对照组荧光强度也应该比较高才对。为什么仅仅标记CD45后才发生这样的情况呢？

niwanmao

陌上桑 发表于 2016-8-2 18:49
如果是这样的话，空白组和同型对照组荧光强度也应该比较高才对。为什么仅仅标记CD45后才发生这样的情况呢 ...

哦，你其它两管是空白和同型？那更合理了，同样的细胞，空白肯定最低，因为是用于调节电压，而非用于做对比的，同型的话，以前我发过N多帖子强调过，同型也不建议用于设门，因为你要挑到相同亚型、相同F/P比的同型，跟中奖的难度差不多，一般建议是用生物学对照。

假如算你的同型是挑中了，那么这个CD45荧光强度也只能算dim，其实你最好是做一个同种细胞的阳性对照，你就能够看出什么样才算真正的阳性了。

陌上桑

niwanmao 发表于 2016-8-2 19:52
哦，你其它两管是空白和同型？那更合理了，同样的细胞，空白肯定最低，因为是用于调节电压，而非用于做对 ...

现在就是找不到同种细胞的CD45阳性。因为我做的是干细胞，理论上不表达CD45的

niwanmao

陌上桑 发表于 2016-8-2 20:14
现在就是找不到同种细胞的CD45阳性。因为我做的是干细胞，理论上不表达CD45的 ...

不是这个意思，这个是同物种，例如你做的是人干细胞，那么就可以找人的粒细胞或淋巴细胞做CD45阳性对照啊。

陌上桑

niwanmao 发表于 2016-8-2 21:49
不是这个意思，这个是同物种，例如你做的是人干细胞，那么就可以找人的粒细胞或淋巴细胞做CD45阳性对照啊 ...

不同种类的细胞，细胞表面的抗原数量也不一样了，所以拿来做对照的话，只能确定阳性的强弱，这是我的理解，不知道对不对。在上面的图里面，我的理解是这样的：1.细胞不表达CD45，只是由于染料的原因，自身本底增强，所以荧光右移；2.细胞不表达CD45，只是与抗体非特异性结合；3.有一部分细胞弱表达CD45，表达很低。请问倪老师，上面3点哪个更靠谱呢？