有关MDC测自噬的问题

niwanmao

标题：有关MDC测自噬的问题

我根据所查阅的文献在sigma购买了货号为30432的MDC进行细胞自噬的检测，根据文献是在临用前用PBS将MDC配置成为0.05mmol的溶液，可是为什么我的MDC没有办法溶解，静置一段时间后仍然会沉积在流式管底，根本就无法上机？麻烦大家帮我看看哪里出了问题，非常感激！

回答者：niwanmao

都是用PBS溶解的。建议：

1、检查PBS是否有问题？

2、在MDC染色前，先用PBS洗涤细胞，尽量去除培养基等影响因素。

3、如果上述措施 [table] [tr][td]���ڿ���ζ������⣿[/td][/tr] [/table]处理后还是出现沉淀，可能类似于一些细胞周期PI染色时出现的特殊情况，可在上机前用300目筛网过滤，去除沉淀。一般不会影响检测。

2009年8月12日 0:54

标题：关于抗体滴定的问题？

抗体滴定时判断哪个剂量合适是根据浓度曲线的，标准滴定时用8个梯度，画出曲线，看在哪个浓度开始曲线变平了，那就是最合适的浓度，既节省抗体，又能达到有效染色？

这一步不是很明白，倪老师能否举一个例子的protocol？怎么去画浓度，浓度时荧光值还是什么？

回答者：niwanmao

1、如果要节省抗体，干脆就直接用推荐剂量得了。

2、同型对照加的量我建议按照浓度进行换算。比如你Foxp3加了5ug，那么同型对照也加5ug，根据它的浓度，换算一下体积。

3、检测Treg还是应该CD4、CD25、FoxP3三个放一管，多色方案，做单标你就没法分析Treg了。

4、抗体滴定时判断哪个剂量合适是根据浓度曲线的，标准滴定时用8个梯度，画出曲线，看在哪个浓度开始曲线变平了，那就是最合适的浓度，既节省抗体，又能达到有效染色。

2009年8月12日 0:54