小鼠加刺激剂后CD4分选不出来怎么办？

DanlionChy120

求解答！
我在做4个细胞的流式：th17，treg，th9跟th22。
treg不用加BFA、PMA刺激剂CD4能分得出来，而TH9、th17、th22这三个细胞需要用PMA、BFA刺激4-6小时，做了4次流式，CD4都分不出来。
请问这是什么问题？刺激剂会影响小鼠CD4的表达跟标记吗？
（PMA跟BFA用的都是联科的）

th9

niwanmao

刺激后CD4发生内吞，所以会导致CD4很难分群，从图上看是有的，只是分不开。
建议：
1、改用CD3＋CD8－代替，尽管会不太准确，但作为替代也是可以的。
2、试试固定破膜后染胞内的CD4。

DanlionChy120

niwanmao 发表于 2016-8-9 21:39
刺激后CD4发生内吞，所以会导致CD4很难分群，从图上看是有的，只是分不开。
建议：
1、改用CD3＋CD8－代替 ...

老师，是将第③步的CD4孵育跟第④步的用A液孵育换一下顺序吗？先破膜再孵育会不会对CD4的标记有影响呢？

niwanmao

DanlionChy120 发表于 2016-8-12 15:21
老师，是将第③步的CD4孵育跟第④步的用A液孵育换一下顺序吗？先破膜再孵育会不会对CD4的标记有影响呢？ ...

这两个是破膜剂？如果是的话，不是调换，而是把加CD4那步和IL-17、IL-22抗体一起加。

DanlionChy120

niwanmao 发表于 2016-8-12 20:01
这两个是破膜剂？如果是的话，不是调换，而是把加CD4那步和IL-17、IL-22抗体一起加。 ...

好的，明天再试一下，谢谢老师。

xuexi-ing

DanlionChy120 发表于 2016-8-14 22:09
好的，明天再试一下，谢谢老师。

您好，请问一下您刺激后对CD3的表达或分群有影响吗？

shunlifasci

DanlionChy120 发表于 2016-8-14 22:09
好的，明天再试一下，谢谢老师。

求回复啊。看了很多帖子，说是可以尝试固定破膜后染CD4，但是都没有反馈……