流式新手求教

wksnzh

我想知道我对样品的处理怎么样，怎么参照同型对照和FMO设门，另外我想要的是嗜碱性粒细胞，请问最后一张图我有没有画到嗜碱性粒细胞，总之就是样品测了，就是不知道接下来该怎么做了。谢谢赐教。

这个分群好么，碎片多么，血液样品，该怎么改进？

横轴的是CD45，选取的白细胞，有什么问题

这个是粒细胞的标记

niwanmao

你的样本是不是用美天旎的流式细胞仪测的？R660是CD45？

嗜碱粒细胞也按照其表达特点选择：在CD45/SSC图上，嗜碱粒细胞往往夹在原始细胞区域、单核细胞区域、淋巴细胞区域之间。CD13、CD33、CD11b均阳性，与粒细胞表达相似。但缺乏CD16、CD15和HLA-DR表达，而CD117的表达有弱阳性，也有阴性

wksnzh

niwanmao 发表于 2016-9-5 14:03
你的样本是不是用美天旎的流式细胞仪测的？R660是CD45？

嗜碱粒细胞也按照其表达特点选择：在CD45/SSC图上 ...

R660是CD45，是BD的流式细胞仪，YG582是CD203c,我做的没用您说的那些抗体，您觉得我对样品处理的怎么样，图像的质量怎么样，另外怎么根据FMO和同型对照设门，谢谢
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niwanmao

wksnzh 发表于 2016-9-5 14:41
R660是CD45，是BD的流式细胞仪，YG582是CD203c,我做的没用您说的那些抗体，您觉得我对样品处理的怎么样， ...

样本处理不好，95％以上的红细胞和碎片，并且凋亡细胞也挺多。FSC太大，细胞都跑出去了。

wksnzh

niwanmao 发表于 2016-9-5 19:20
样本处理不好，95％以上的红细胞和碎片，并且凋亡细胞也挺多。FSC太大，细胞都跑出去了。 ...

是不是我裂解做的不好，是不是处理样品的时间太长，处理完样品如果3,4个小时再测的话是不是有影响，细胞凋亡比较多，谢谢老师

niwanmao

wksnzh 发表于 2016-9-5 19:34
是不是我裂解做的不好，是不是处理样品的时间太长，处理完样品如果3,4个小时再测的话是不是有影响，细胞 ...

裂解不够，检测的时间太晚都有关系。

wksnzh

niwanmao 发表于 2016-9-5 20:09
裂解不够，检测的时间太晚都有关系。

老师，同型对照的荧光强度比样本强或者没有明显的差异，是不是就不用调节什么了

niwanmao

wksnzh 发表于 2016-9-6 09:47
老师，同型对照的荧光强度比样本强或者没有明显的差异，是不是就不用调节什么了 ...

没看懂什么意思。

wksnzh

niwanmao 发表于 2016-9-6 10:26
没看懂什么意思。

同型对照的荧光强度比样本强或者没有明显的差异，怎么调节？

niwanmao

wksnzh 发表于 2016-9-6 10:40
同型对照的荧光强度比样本强或者没有明显的差异，怎么调节？

调节什么？同型对照比样本强的原因我之前有帖子写过，大多是由于同型对照没选对。对于多色实验，建议以生物学阴性样本作为设门参照才是金标准，其次是FMO对照，而同型对照是无可奈何的选择，而且同型对照的意义不是用来设门，而是评估抗体非特异性结合背景的高低，不能反映其它背景信号。