分选细胞后活率较低的问题

seawidesky

      瞬转的ID8 mouse 细胞,培养大概36个小时,境下观察细胞状态还好,流式分选,GFP阳性率大概5%左右,分选挑选的是强阳性的2%左右,分别分选到96孔板(单细胞,25块细胞培养板)和6孔板里(细胞群),一个星期后发现所有的96孔板里面都只有一两个长了克隆(虽然细胞状态比较好),6孔板里面细胞状态较差。但是之前分选的人淋巴细胞群生长状态挺好的，然后这个细胞系就不行了，想问下有没有高手养过这种细胞？分选的时候有什么需要注意的吗？

niwanmao

分选本身对细胞存在一定伤害，这个无法完全避免，不过可以适当优化：
1、在孔板加入含FBS的培养基。
2、分选时的鞘液压力适当降低至45～50psi。

后面的培养上也比较关键，有没有试过增加FBS含量或者其它办法。

seawidesky

niwanmao 发表于 2016-9-7 18:27
分选本身对细胞存在一定伤害，这个无法完全避免，不过可以适当优化：
1、在孔板加入含FBS的培养基。
2、分 ...

这个细胞用的是100um的喷嘴，仪器预设的压力是20psi，不知道这个压力能不能减少，会对液流有什么影响。

niwanmao

seawidesky 发表于 2016-9-8 09:21
这个细胞用的是100um的喷嘴，仪器预设的压力是20psi，不知道这个压力能不能减少，会对液流有什么影响。 ...

压力和喷嘴大小应该问题不大，在培养基上下点功夫试试

fushuai5130

这个和PSI鞘液压力关系不大。 如果改变PSI 的话 振动频率就发生改变。但是喷嘴的大小是确定的。如果贸然改变PSI鞘液压力 反而导致分选的速度 和 液滴 形成的质量改变。可以改变一下上样培养基的FBS 浓度。

fushuai5130

强烈途径使用 各种喷嘴的 默认要求鞘液压力！ 不要冒然改变鞘液压力。