流式染色方案

南医小硕

我想染表面抗原H-2Kb,CD45,CD4,CD8,然后一般常用抗原有PE,FITC,APC,PerCP5.5,一般的原则是为最弱的抗原选择染色指数最高的荧光素，多色时选择发射谱重叠小的染料组合，我感觉这几个抗原表达的强弱是不是也差不多呀，那这四个抗原与PE,FITC,APC,PerCP5.5之间是否可以随意搭配了，还是有最佳的流式方案推荐吗？上机用的机器是BD LSR。

niwanmao

可以随意搭配的，问题不是很大。不过你要检测的应该是H-2Kb吧？那最好把H-2Kb用APC标记，尽量减少补偿。

南医小硕

niwanmao 发表于 2016-9-18 10:32
可以随意搭配的，问题不是很大。不过你要检测的应该是H-2Kb吧？那最好把H-2Kb用APC标记，尽量减少补偿。 ...

好的，谢谢老师

南医小硕

niwanmao 发表于 2016-9-18 10:32
可以随意搭配的，问题不是很大。不过你要检测的应该是H-2Kb吧？那最好把H-2Kb用APC标记，尽量减少补偿。 ...

那老师要是想分析T淋巴细胞分群情况即初始T，效应T，记忆T的话，就要在染H-2Kb,CD45,CD4,CD8基础上加染CD44和CD62L两种抗原了，请问有这个的推荐的6色染色方案吗？

niwanmao

南医小硕 发表于 2016-9-18 17:55
那老师要是想分析T淋巴细胞分群情况即初始T，效应T，记忆T的话，就要在染H-2Kb,CD45,CD4,CD8基础上加染CD4 ...

我们检测人的淋巴细胞一般用CD45RA、CD45RO和CCR7。

南医小硕

niwanmao 发表于 2016-9-18 19:44
我们检测人的淋巴细胞一般用CD45RA、CD45RO和CCR7。

哦，我们做的是小鼠的

niwanmao

南医小硕 发表于 2016-9-18 22:24
哦，我们做的是小鼠的

帮你查了下资料，可以用CD44、CD62L区分小鼠的初始、记忆和效应T。设门如下图：1、选择CD3＋CD4＋T细胞。


2、在CD44/CD62L散点图上，选择初始T（CD44loCD62Lhi）、记忆T（CD44hiCD62Llo）以及效应T（CD44lo、CD62Llo）。

zhsna

niwanmao 发表于 2016-9-18 19:44
我们检测人的淋巴细胞一般用CD45RA、CD45RO和CCR7。

老师有没有遇到过，检测初始T，CCR7比62L表达低的情况？同时染CCR7和62L，62L可以分群，CCR7表达很少。

yuan743561169

niwanmao 发表于 2016-09-19 08:30:11

                               
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帮你查了下资料，可以用CD44、CD62L区分小鼠的初始、记忆和效应T。设门如下图：1、选择CD3＋CD4＋T细胞。

中枢记忆T细胞跟效应记忆T细胞要怎么区分呢

niwanmao

yuan743561169 发表于 2016-9-20 08:15
中枢记忆T细胞跟效应记忆T细胞要怎么区分呢

比较简单的方法是用CCR7
CCR7＋CD45RA－ 中央记忆T
CCR7－CD45RA－ 效应记忆T